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CRISPR-Cas9常見問題解答(FAQ),助您輕松解決實(shí)驗(yàn)困惑!

CRISPR-Cas9常見問題解答(FAQ),助您輕松解決實(shí)驗(yàn)困惑!

CRISPR-Cas9作為目前最常使用的基因編輯系統(tǒng),已廣泛應(yīng)用于人類細(xì)胞、斑馬魚、小鼠以及細(xì)菌的基因組精確修飾。CRISPR-Cas9基因編輯技術(shù)在一系列基因治療的應(yīng)用領(lǐng)域都展現(xiàn)出極大的應(yīng)用前景,例如血液病、腫瘤和其他遺傳疾病。然而,在基因編輯實(shí)驗(yàn)中我們卻經(jīng)常會(huì)被一些問題所困擾,特別是對(duì)于新手小白來說。下面小編就以riboEDIT? CRISPR-Cas9為例,匯總了基因編輯實(shí)驗(yàn)中常見的一些問題解答,希望可以對(duì)正在或即將要進(jìn)行CRISPR-Cas9基因編輯實(shí)驗(yàn)的各位小伙伴們有所幫助!   riboEDIT?...

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lncRNA新研究進(jìn)展盤點(diǎn)(20210520)

lncRNA新研究進(jìn)展盤點(diǎn)(20210520)

Nat Cell Biol丨LIMIT是一種癌癥免疫和免疫療法中具有免疫原性的lncRNA IF:20.040? 2021年5月6日   MHC-1(主要組織相容性復(fù)合物-I)將腫瘤抗原呈遞給CD8+ T細(xì)胞,并觸發(fā)抗腫瘤免疫。人類可能擁有30,000-60,000個(gè)長(zhǎng)鏈非編碼RNAs(lncRNAs)。然而,對(duì)于lncRNAs是否影響腫瘤免疫仍然知之甚少。本研究在人類和小鼠中鑒定了一個(gè)lncRNA...

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基因編輯實(shí)驗(yàn)壁壘多?不妨試試Cas9 RNP體系

基因編輯實(shí)驗(yàn)壁壘多?不妨試試Cas9 RNP體系

CRISPR-Cas9是一種在gRNA或crRNA+tracrRNA存在的條件下通過Cas9蛋白實(shí)現(xiàn)對(duì)基因組定點(diǎn)編輯的技術(shù),Cas9和gRNA或crRNA+tracrRNA可通過多種方式導(dǎo)入細(xì)胞,其在胞內(nèi)的高效表達(dá)直接影響CRISPR-Cas9系統(tǒng)的編輯效率。通常情況下以慢病毒感染或質(zhì)粒轉(zhuǎn)染等方式提供Cas9和gRNA。然而,這容易導(dǎo)致外源基因片段的不可控插入,并引起免疫反應(yīng),存在潛在的威脅,這在一定程度上限制了CRISPR-Cas9技術(shù)在機(jī)體的應(yīng)用[1]。   近年發(fā)展起來的Cas9...

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基于Cas9 mRNA的全RNA體系,讓基因編輯更簡(jiǎn)單!

基于Cas9 mRNA的全RNA體系,讓基因編輯更簡(jiǎn)單!

mRNA可瞬時(shí)表達(dá)所需的蛋白質(zhì),并且沒有插入突變的風(fēng)險(xiǎn),已經(jīng)成為基因組編輯的強(qiáng)有力工具。相比于傳統(tǒng)方法(質(zhì)粒和病毒載體),通過mRNA進(jìn)行基因編輯可避免許多諸如核酸酶的持續(xù)表達(dá)、或由于質(zhì)粒和病毒的整合而無意激活先前沉默的基因組位點(diǎn)的風(fēng)險(xiǎn)。 ? CRISPR/Cas9作為目前最常使用的基因編輯系統(tǒng),在crRNA和tracrRNA復(fù)合物(guide RNA)指導(dǎo)下,可將mRNA瞬時(shí)表達(dá)的Cas9蛋白靶向目標(biāo)位點(diǎn)以進(jìn)行DNA切割。銳博生物科學(xué)家團(tuán)隊(duì)基于豐富的合成經(jīng)驗(yàn),自主開發(fā)了采用天然復(fù)合物系統(tǒng)的全RNA...

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miRNA新研究進(jìn)展盤點(diǎn)(20210514)

miRNA新研究進(jìn)展盤點(diǎn)(20210514)

Nature丨胚胎胚層特化的全局miRNA劑量控制 ? IF:42.778? 2021年5月5日 ? MicroRNAs(miRNAs)在胚胎發(fā)育過程中具有重要的功能,其失調(diào)會(huì)導(dǎo)致癌癥。在不同的組織和腫瘤中發(fā)現(xiàn)了全局miRNA豐度的變化,這意味著精確控制miRNA劑量是很重要的,但是這種控制的潛在機(jī)制仍然未知。蛋白質(zhì)復(fù)合物微加工器(包含一個(gè)DROSHA和兩個(gè)DGCR8蛋白)對(duì)于miRNA生物發(fā)生至關(guān)重要。本研究確定了一種發(fā)育調(diào)控的miRNA劑量控制機(jī)制,涉及DGCR8的選擇性轉(zhuǎn)錄起始(ATI)。ATI發(fā)生在DGCR8...

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Nature子刊丨西安交大一附院侯鵬組揭示非編碼RNA SNORD50A/B促進(jìn)p53野生型乳腺癌生長(zhǎng)的作用機(jī)制

Nature子刊丨西安交大一附院侯鵬組揭示非編碼RNA SNORD50A/B促進(jìn)p53野生型乳腺癌生長(zhǎng)的作用機(jī)制

乳腺癌是全世界女性中最常見的惡性腫瘤,大約八分之一至十分之一的女性可能在其一生中患上乳腺癌。得益于早期發(fā)現(xiàn)和有效的系統(tǒng)性療法,北美和西歐國家的乳腺癌死亡率正在下降。但是,乳腺癌仍然是發(fā)展中國家癌癥相關(guān)死亡最常見原因之一。因此,更好地了解乳腺癌的發(fā)病機(jī)制將有助于更準(zhǔn)確的預(yù)后預(yù)測(cè)以及進(jìn)行更有效的治療。...

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Nature子刊丨高內(nèi)涵RNAi篩選揭示lncRNAs在細(xì)胞分裂中的多種作用

Nature子刊丨高內(nèi)涵RNAi篩選揭示lncRNAs在細(xì)胞分裂中的多種作用

基因組穩(wěn)定性依賴于有絲分裂和胞質(zhì)分裂的適當(dāng)協(xié)調(diào),其中動(dòng)態(tài)微管捕獲并如實(shí)將染色體分離到子細(xì)胞。英國倫敦大學(xué)瑪麗皇后學(xué)院Lovorka Stojic研究組聯(lián)合劍橋大學(xué)Fanni Gergely及Duncan T. Odom研究組通過靶向2000多個(gè)人類lncRNAs的高內(nèi)涵RNAi成像篩選,鑒定了許多參與細(xì)胞分裂關(guān)鍵步驟的lncRNAs,如染色體分離、有絲分裂持續(xù)時(shí)間和胞質(zhì)分裂。并揭示了與基因組穩(wěn)定性有關(guān)的幾種lncRNAs,以及控制微管行為并具有細(xì)胞分裂以外功能的lncRNA,相關(guān)研究成果已發(fā)表在Nature...

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Nature子刊丨lncRNA DRAIC是一種新型自噬調(diào)節(jié)因子

Nature子刊丨lncRNA DRAIC是一種新型自噬調(diào)節(jié)因子

自噬是發(fā)生在所有真核細(xì)胞中的一種保守的降解過程,其功能障礙與包括癌癥在內(nèi)的多種疾病有關(guān)。盡管目前有大量的研究發(fā)現(xiàn)了包括蛋白質(zhì)和miRNAs在內(nèi)的自噬調(diào)控新分子,但對(duì)于長(zhǎng)鏈非編碼RNAs(lncRNAs)在該調(diào)控過程中的功能卻知之甚少。 為了鑒定自噬過程中新的功能性lncRNAs,研究人員針對(duì)600多個(gè)lncRNAs轉(zhuǎn)錄本進(jìn)行了高通量RNAi篩選,并監(jiān)測(cè)其對(duì)MCF-7細(xì)胞自噬的影響。鑒定并揭示了lncRNA...

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