銳博生物運用pmiR-RB-Report?報告基因檢測系統構建您研究的 miRNA 靶基因3’UTR 區域,您只需將miRNA mimic 與構建好的靶基因載體共轉,即可檢測miRNA 是否對靶基因有調控作用。pmiR-RB-Report?報告基因檢測系統專門用來檢測miRNA 與靶基因的結合活性,該報告系統包含T7 啟動子驅動的報告熒光(hRluc),其下游構建了靶基因3’UTR 區域,通過對該熒光的檢測,即可驗證miRNA 對該靶標是否有調控作用;另有一校正熒光(hluc)用于監測轉染效率,靶標表達效率,可作為穩定內參。
銳博生物可以根據客戶需要定制任何基因的3’UTR 雙熒光素載體。
pmiR-RB-ReportTM雙熒光素酶質粒載體轉染進入細胞后,轉錄出 hRluc 與靶基因3’UTR 區域組合而成的特殊mRNA,如果miRNA mimic能夠與包含靶基因3’UTR 的mRNA 互補結合,則熒光素酶的表達活性也受到顯著影響,通過檢測熒光素酶的熒光強度可定量分析miRNA 對靶基因的mRNA 調控效果。
miRNA 靶基因驗證實驗通常需要設置預測靶點突變組,以確認miRNA靶點正確性。只有兩者結合,才能準確地驗證miRNA靶點信息。
項目案例

熒光素酶報告基因試驗數據顯示miR-7 inhibitor 處理后活性更高,miR-7 mimic 處理后活性下降。Yu Q, et al. J CrohnsColitis. 2016.

轉染miR-9 inhibitor 進SH-SY5Y 和SK-N-SH 細胞,增加了熒光素酶活性,而Mutant 3’?-UTR 沒有此效果。 Zhang H, et al. Mol Cancer Ther. 2012.
注意事項:
由于構建難度和實驗難度隨著基因3’UTR 長度的增加而顯著升高,建議構建長度不超過2.5kb。

