siRNA篩選實驗是簡單易行的確定基因功能的實驗,序列設計是RNAi實驗成功的關鍵,選擇不同區域設計siRNA會獲得不同的效果,銳博生物為您提供有效siRNA篩選服務,提供常規siRNA、套裝siRNA和siRNA定制文庫或全基因組文庫,少數的篩選實驗運用qPCR方法驗證沉默效率,大量的篩選實驗還可以運用雙平臺高內涵篩選策略,確保更可靠更有意義的實驗發現,全面加速您的mRNA、lncRNA和circRNA實驗研究進程。
服務流程
a、針對待篩選基因設計并合成三對siRNA及基因qPCR引物;
b、進行基因qPCR引物有效性檢測;
c、細胞培養:提供常規腫瘤細胞系(如A549、Hela等),其他細胞系需定制;
d、轉染3對靶基因siRNA:1對Negative control,1對Positive control,1對 Transfection control;
e、熒光顯微鏡檢測轉染對照的轉染效果;
f、48小時后抽提細胞總RNA,以內參基因作為參照,用qRT-PCR方法檢測mRNA水平siRNA沉默效率;
g、鑒定有效siRNA后(沉默效果>70%),向客戶提供篩選實驗報告。
項目舉例
針對p65基因的三對siRNA及陰性對照(銳博生物)以50nM終濃度轉染A549細胞(riboFECT CP 轉染試劑),48h后qRT-PCR方法檢測p65基因mRNA水平的表達,檢測三對siRNA的沉默效果及siRNA轉染效率。

圖2 采用熒光轉染對照檢查該細胞系的siRNA轉染效率

圖3?采用qPCR方法檢測siRNA轉染后的P65及ACTB的RNA表達水平

圖4?有效siRNA統計效率圖

