外泌體研究首先要求我們提取出高質量且功能和結構完整的Exosome，隨后需要對分離的外泌體進行鑒定，以證明得到的產物是外泌體。接下來就可以對鑒定的外泌體進行下一步的測序或功能研究了。因此，外泌體提取和鑒定是外泌體研究至關重要的步驟。
今天，小編要給大家推薦的就是銳博生物推出的外泌體抽提與鑒定技術服務，結合自主專利外泌體抽提技術，提供更加專業化的服務支持，檢測結果真實可靠，讓您的外泌體研究事半功倍！
技術服務內容：
對樣品外泌體抽提樣本進行Exosome粒徑檢測和流式細胞儀表面標記物檢測。
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01. Exosomes提取【自主專利產品、客戶文章1600+篇】
采用新型Exosomes提取工具–Ribo? Exosome Isolation Reagent，可從細胞上清、血清血漿或其他體液中獲取大量結構和功能完整的Exosome。
HeLa 細胞上清經Ribo?Exosome Isolation Reagent 抽提，用攜帶熒光基團的CD63 和CD81 抗體分別與抽提前樣本及抽提產物進行免疫反應，使用流式細胞儀檢測熒光強度。結果表明，抽提前兩個標志物抗體熒光強度均處于背景閾值范圍內，抽提后熒光強度明顯提升，呈現陽性結果，表明exosomes 被富集出來。
02. 粒徑檢測
Zetasizer 儀器根據Stokes-Einstein 原理，使用動態光散射檢測由于顆粒布朗運動而產生散射光的波動隨時間的變化。檢測器將散射光信號轉化為電流信號，再通過數字相關器的運算處理，得到顆粒在溶液中擴散的速度信息，即擴散系數。該體系適用于所有能夠穩定存在于溶液中作布朗運動的顆粒，典型體系包括：乳液、有機/無機顆粒、自然/合成高分子溶液、表面活性劑、病毒、蛋白質樣品等。
H460細胞上清經Ribo Exosomes Isolation Reagent抽提，Zetasizer Nano ZS 納米粒度儀檢測粒徑分布。
（注：實際檢測結果受不同樣本來源、樣本的純度等因素的影響，圖片僅供參考）
03. 表面標記物檢測
Exosome表面保留有較完整的抗原，可使用熒光直標是特異性單克隆抗體孵育Exosome，再用流式細胞儀進行檢測，根據所測定的熒光強度即可知其 表面抗原分布的情況。從而實現Exosome表面抗原檢測。Exosomes常見的特異性標記蛋白為CD63和CD81，使用熒光直標的CD63和CD81抗體結合流式細胞術能夠大致檢測出樣品含有CD63和CD81的情況。（特別提醒：流式鑒定提供的是人源CD63和CD81，其他物種或其他表面標志蛋白需客戶提供直標抗體）
H460細胞上清經Ribo Exosomes Isolation Reagent抽提，流式鑒定Exosomes表面標志物CD63和CD81。
（注：實際檢測結果受不同樣本來源、樣本的純度等因素的影響，圖片僅供參考）
項目流程：
售前咨詢→銷售提交合同審核→客戶簽訂合同→客戶送樣→啟動項目→完成項目后反饋銷售→發送實驗報告
樣本類型：
1. 原始樣本（血清、血漿、細胞上清）
2. 提取好的外泌體
* 干冰送樣，不要反復凍融！
項目周期：
1. 客戶提供血清、血漿、細胞上清等原始樣本，周期一般15個工作日
2. 客戶提供提取好的外泌體，周期一般10個工作日（正常情況下1周內即可出具實驗報告）
服務特點：
1. 自主專利Exosomes提取試劑盒，廣泛適用于細胞上清、血清血漿或其他體液
2. 提供外泌體提取與鑒定一站式服務，性價比高
3. 合理的項目周期，快至1周內可出具實驗報告
4. 檢測結果真實唯一，提供實驗原始數據，準確可靠
5. 優質的服務體驗，提供專人專項售前售中售后技術解答
客戶案例：
Cerebrovascular Diseases丨Diagnosis of Hyperacute and Acute Ischaemic Stroke The Potential Utility of Exosomal MicroRNA-21-5p and MicroRNA-30a-5p
納米顆粒跟蹤分析：分離的外泌體的粒徑分布由Ribobio Co.LTD (Guangzhou, China)使用ZETASIZER Nano series-Nano-ZS進行檢測。簡要地說，將1 mL無外泌體的PBS添加到重懸的外泌體中，并將混合物緩慢注入干凈的無顆粒樣品池中，避免形成氣泡。將樣品池蓋好并放入儀器中。根據標準方案進行操作即可。
流式細胞術分析：外泌體用CD63或CD81抗體熒光標記。將100μl無外泌體的PBS加到重懸的外泌體中。隨后，將混合物在20μL抗體（CD63或CD81）中孵育。未標記的樣品作為陰性對照。然后由Ribobio Co. LTD使用accuriC6 flow cytometer進行檢測。
Wang W, et al. Cerebrovascular Diseases, 2018, 45(5-6): 204-212.
結果展示：
分析報告顯示，80％的顆粒大小在20-200nm之間（圖c），在外泌體的預期大小范圍內。
流式細胞術分析顯示，CD63和CD81的陽性率分別為80.6％和91.7％。陰性對照的陽性率為5.7％（圖1d），證實了它們是外泌體。
J Cell Mol Med丨MicroRNA-30a ameliorates hepatic fibrosis by inhibiting Beclin1-mediated autophagy
外泌體的分離和鑒定：LX-2細胞在含有10％無外泌體FBS的DMEM中培養。使用Ribo? Exosome Isolation Reagent (for cell culture media) (RiboBio, Guangzhou, China)提取LX-2外泌體。然后使用Accuri C6流式細胞儀分析了外泌體標志物CD63和CD81。用ZETASIZER Nano series-Nano-ZS檢測了外泌體的粒徑。
Chen J, et al. Journal of cellular and molecular medicine, 2017, 21(12): 3679-3692.
結果展示：
FCM分析（圖D）和粒徑檢測（圖E）顯示LX-2外泌體表達外泌體標記物（CD63和CD81），直徑范圍為20-200nm。
Exosome送樣建議：
注意：分離exosome前的樣品不能加入任何RNA保護劑（如Trizol，RNA later）
送樣須知：
1. 血清樣品
1）采血后，輕輕將全血滴入潔凈的EP管或者離心管
2）室溫下靜置3~4小時，可見血塊析出（也可放置4度冰箱過夜）
3）5000rpm，離心10min，可見淡黃色血清，取出上清后可再3000rpm離心10min，以最大程度保證血清質量
4）將血清分裝，送樣前可凍存于-80度
提示：送樣量最好2mL以上
2. 血漿樣品（不能用肝素抗凝）
1）用采血針和抗凝管（含EDTA）抽取全血，混勻
2）室溫下靜置3~4小時（也可放置4度冰箱過夜），5000rpm，離心5min，取上清即為血漿
3) 可將血漿分裝，送樣前可凍存于-80度
提示：送樣量最好4mL以上
3. 細胞上清
需要提前預備的實驗材料：去除Exosome的血清（自己制備或購買）
1）培養皿的細胞匯合率達到80%~90%時
2）把原有培養基吸掉，加適當的胰蛋白酶（能覆蓋細胞就行）進行消化
3）細胞變圓后加入等體積的含正常血清培養基終止消化
4）用移液槍吹打細胞，把細胞都懸浮起來
5）1100rpm，離心5分鐘
6）吸掉上清液，用無Exosome血清的培養基清洗細胞一次
7）1100rpm，離心5分鐘
8）吸掉上清液，加入Exosome血清的培養基，懸浮細胞
9）根據細胞種類把細胞傳到幾個培養皿中（收集上清時細胞匯合率為60%~80%），繼續培養
10）培養48h~72h后，收集細胞上清
11）2000rpm，離心10min，然后10000rpm, 離心30min, 去除細胞或者細胞碎片，取上清即可
提示：送樣量最好20mL以上
4. 尿液
1）用15mL離心管收集尿液
2）2500~3000rpm，離心15min，去除細胞，取上清
3）送樣前可凍存于-80度
提示：送樣量最好10mL以上
委托技術服務：
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http://www.jyzfjx.com/our-services/exosome-research-service/
| 服務編號 | 服務名稱 | 目錄價 |
| Varies | 外泌體抽提服務 | 在線詢價 |
| Varies | 外泌體粒徑分析 | 在線詢價 |
| Varies | 外泌體表面蛋白標記檢測 | 在線詢價 |
| Varies | 外泌體鑒定（粒徑+表面蛋白標記檢測） | 在線詢價 |
| Varies | 外泌體抽提與鑒定（粒徑+表面蛋白標記檢測） | 在線詢價 |
