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研究發現,外泌體作為一類含有DNA、RNA、蛋白質和脂類的微囊,廣泛參與調控重要的細胞生理活動。外泌體RNA特別是非編碼RNA,在不同的疾病模型中存在明顯的表達差異,有望成為疾病診斷、個性化治療和預后的重要分子標志物,并揭示疾病發生的機理。利用高通量轉錄組測序技術可以同時檢測其所含有的RNA分子(如miRNA、lncRNA),從而對外泌體RNA的鑒定和功能調控進行深入研究。

 

因此,使用Ribo?Exosome Isolation Reagent提取的外泌體產物,通過粒徑分析和表面蛋白標記物鑒定之后,就可以利用外泌體RNA測序技術來篩選差異表達的目標RNAs分子,后續研究可以圍繞外泌體RNA的功能與作用機制或者鑒定RNA標志物以開發體液診斷試劑盒~~~

 

■ 銳博生物外泌體RNA測序
■ 結合自主專利外泌體抽提技術
■ 先進的微量建庫技術
■ 采用NEB進口建庫試劑,僅需ng級別RNA
■ 成功率>95%,成功合作項目>4000例

 

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環化熱圖

基因功能富集分析圖

miRNA-靶基因調控網絡

ceRNA網絡分析

lncRNA-靶基因調控網絡

客戶相關科研成果發表在諸如Journal of Hepatology、Circulation Research、Molecular Cancer、Signal Transduction and Targeted Therapy、Journal of Extracellular Vesicles等國際知名期刊!

外泌體small RNA測序

測序內容 推薦測序模式 建庫方式
siBDM0001-5 HiSeq 2500, SE50,10M clean reads(3條siRNA,各5nmol) RNA末端接頭法
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技術特色:

? 專利外泌體抽提技術,配合特有微量RNA建庫方法,提供miRNA測序整體服務

? 3個數據庫深度挖掘及分析疾病相關miRNA biomarker;

? 4個最新數據庫預測靶基因,結果更準確;

? 可提供piRNA 差異分析(限定物種,人、大鼠、小鼠);

? 采用3 個外泌體或囊泡數據庫,注釋信息更完善,深入挖掘研究結果的佐證;

? 提供腫瘤研究的臨床數據分析,使得分析結果更加飽滿。

 

應用案例:

Journal of Hepatology丨Hepatocyte-Derived Extracellular Vesicles Promote Endothelial Inflammation and Atherogenesis via microRNA-1

臨床證據表明非酒精性脂肪肝(NAFLD)與心血管疾病(CVD)密切相關。然而,其潛在機制仍有待闡明。為了探討NAFLD狀態下肝細胞來源的細胞外囊泡(EVs)在內皮炎癥和動脈粥樣硬化形成中的潛在作用。研究人員分離了正常對照和DIO小鼠肝細胞來源的EVs,提取EVs總RNAs,構建small RNA文庫并進行小RNA測序以確定EVs中miRNA表達譜變化。

 

? EVs miRNA表達譜差異:

結果發現,與對照肝細胞釋放的EV相比,脂肪肝細胞釋放更多的EVs,并能顯著改變miRNA表達譜。與脂肪肝細胞共培養的內皮細胞(或用肝細胞釋放的EVs或miR-1處理的內皮細胞)中表達的促炎分子明顯更多,并可增加NF-κB活性和降低KLF4表達。

 

? miR-1體內外功能鑒定:

下調或抑制miR-1可預防EV誘導的內皮炎癥。盡管miR-1治療抑制了KLF4的表達和報告基因的活性,但過表達KLF4極大地消除了miR-1誘導的內皮炎癥。而且,miR-1抑制劑不僅能在體外減少內皮細胞的炎癥,而且還能減弱ApoE缺陷小鼠的動脈粥樣硬化。

 

? 外泌體功能機制研究:

結果表明了脂肪肝細胞衍生的EVs通過miR-1遞送、KLF4抑制和NF-κB活化來促進內皮炎癥和動脈粥樣硬化的形成。這些發現說明了肝細胞衍生的EVs在肝臟與血管系統之間遠距離通訊中的重要作用,揭示了NAFLD與CVD之間聯系的新機制。

 

miRNA在肝細胞源性EVs中的表達譜

(Jiang F, et al. Journal of Hepatology, 2020.)

代表性客戶文章:

[1] Yu L, Sui B, Fan W, et al. Exosomes derived from osteogenic tumor activate osteoclast differentiation and concurrently inhibit osteogenesis by transferring COL1A1-targeting miRNA-92a-1-5p[J]. Journal of Extracellular Vesicles, 2021, 10(3): e12056.

[2] Jiang F, Chen Q, Wang W, et al. Hepatocyte-Derived extracellular vesicles promote endothelial inflammation and atherogenesis via microRNA-1[J]. Journal of Hepatology, 2020, 72(1): 156-166.

[3] Shang A, Gu C, Wang W, et al. Exosomal circPACRGL promotes progression of colorectal cancer via the miR-142-3p/miR-506-3p-TGF-β1 axis[J]. Molecular cancer, 2020, 19(1): 1-15.

[4] Huang W, Yan Y, Liu Y, et al. Exosomes with low miR-34c-3p expression promote invasion and migration of non-small cell lung cancer by upregulating integrin α2β1[J]. Signal Transduction and Targeted Therapy, 2020, 5(1): 1-13.

[5] Fang S B, Zhang H Y, Wang C, et al. Small extracellular vesicles derived from human mesenchymal stromal cells prevent group 2 innate lymphoid cell-dominant allergic airway inflammation through delivery of miR-146a-5p[J]. Journal of extracellular vesicles, 2020, 9(1): 1723260.

[6] Hou Z, Qin X, Hu Y, et al. Longterm exercise-derived exosomal miR-342-5p: a novel exerkine for cardioprotection[J]. Circulation research, 2019, 124(9): 1386-1400.

 

在線委托科研服務:

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外泌體lncRNA測序

測序內容 推薦測序模式 建庫方式
lncRNA (Exosomes) HiSeq, PE150, 12G clean data 銳博特有微量RNA建庫法
?
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技術特色:

? 專利外泌體抽提技術,配合特有微量RNA建庫方法,提供lncRNA測序整體服務

? 采用3 個外泌體或囊泡數據庫,注釋信息更完善,深入挖掘研究結果的佐證;

? 多種差異表達計算方法,可根據項目情況靈活選擇算法,展現更完美的數據;

? 全新的比對軟件,分析速度更快,結果更準確;

? 提供腫瘤研究的臨床數據分析,使得分析結果更加飽滿。

 

應用案例:

BMC immunology丨Identification of differentially expressed circulating exosomal lncRNAs in IgA nephropathy patients

盡管免疫球蛋白A腎?。↖gAN)是最重要的原發性腎小球疾病之一,但IgAN的治療仍處于起步階段。IgAN診斷迫切需要非侵入性生物標志物。本研究旨在探索IgAN患者血漿外泌體長鏈非編碼RNAs(lncRNAs)表達譜與其健康一級親屬之間的差異,這可能揭示新的非侵入性IgAN生物標志物。首先,研究人員從IgAN患者及其一級親屬的血漿中分離出外泌體,然后提取6例IgAN患者及其相關親屬的外泌體總RNA,制備文庫并進行RNA測序。

 

?? 外泌體lncRNA表達譜差異

測序結果顯示有70個差異表達的lncRNAs。與對照組相比,IgAN組有31個lncRNAs表達上調,39個lncRNAs表達下調。

 

?? 候選lncRNAs qRT-PCR驗證

qRT-PCR檢測結果顯示lncRNA-G21551在IgAN患者中較健康親屬明顯下調。有趣的是,通過通路富集分析發現FCGR3B是lncRNA-G21551最近的蛋白編碼基因,其編碼免疫球蛋白G(IgG) Fc段低親和力受體。

 

本研究結果表明外泌體lncRNA-G21551在IgAN患者中表達顯著下調,具有作為IgAN非侵入性生物標志物的潛力。

 

IgAN患者及其對照組的lncRNA差異表達譜

(Guo N, et al. BMC immunology, 2020.)

代表性客戶文章:

[1] Guo N, Zhou Q, Huang X, et al. Identification of differentially expressed circulating exosomal lncRNAs in IgA nephropathy patients[J]. BMC immunology, 2020, 21(1): 1-9.

[2] Xie L, Chen J, Ren X, et al. Alteration of circRNA and lncRNA expression profile in exosomes derived from periodontal ligament stem cells undergoing osteogenic differentiation[J]. Archives of Oral Biology, 2020, 121: 104984.

[3] Xu H, Chen Y, Dong X, et al. Serum exosomal long noncoding RNAs ENSG00000258332. 1 and LINC00635 for the diagnosis and prognosis of hepatocellular carcinoma[J]. Cancer Epidemiology and Prevention Biomarkers, 2018, 27(6): 710-716.

 

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