mRNA可瞬時表達所需的蛋白質，并且沒有插入突變的風險，已經成為基因組編輯的強有力工具。相比于傳統方法（質粒和病毒載體），通過mRNA進行基因編輯可避免許多諸如核酸酶的持續表達、或由于質粒和病毒的整合而無意激活先前沉默的基因組位點的風險。
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CRISPR/Cas9作為目前最常使用的基因編輯系統，在crRNA和tracrRNA復合物（guide RNA）指導下，可將mRNA瞬時表達的Cas9蛋白靶向目標位點以進行DNA切割。銳博生物科學家團隊基于豐富的合成經驗，自主開發了采用天然復合物系統的全RNA CRISPR-Cas9基因編輯體系！
圖1. 全RNA體系工作示意圖
全RNA體系具有如下特點：
? 自主專利技術，優化的gRNA（crRNA與tracrRNA）和Cas9 mRNA
? 瞬時表達，有效降低脫靶率
? 編輯效率更高，適用于哺乳動物細胞
? 毒性更低，激活先天免疫反應更小，減少細胞死亡
? 即用型（Ready-to-Use），更加易用，適合從小規模實驗到大規模高通量篩選
? 兼容多種導入模式：化學轉染（mRNA轉染）、電轉或電穿孔、顯微注射等
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全RNA體系可提供基因編輯效率保證套裝：
銳博生物可針對人源基因提供方便高效的基因編輯效率保證套裝產品，利用設計軟件挑選評分高的5條crRNA進行合成，基于Cas9 mRNA的體系而配置必備試劑，包括tracrRNA、Cas9 mRNA、mRNA轉染試劑、陽性對照crRNA套裝、T7E1酶及配套緩沖液等。可以實現MHCC97H細胞的T7E1酶切效率至少1條達到30%以上并提供相應的售后服務。
| riboEDIT CRISPR-Cas9效率保證套裝產品 | |
| 套裝名稱 | 套裝產品內容 |
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riboEDIT CRISPR-Cas9 mRNA Set （基于mRNA的全RNA體系/針對人源細胞） |
??riboEDIT Designed crRNA（設計合成5條crRNA，每條5nmol） ??riboEDIT tracrRNA， 5nmol ??riboEDIT Positive Control crRNA Validation Set for Human *,? 3*5nmol ??riboFECT mRNA Transfection Reagent, 75ul ??riboEDIT Cas9 mRNA (0.5ug/ul), 20ug ??riboEDIT T7EI Enzyme (10U/ul), 100U |
*效率保證套裝：按說明書操作條件下，對MHCC97H細胞的T7E1酶切效率可實現至少1條達到30%以上，若5條均低于30%，客戶須提供MHCC97H轉染效率與檢測方法步驟，經技術分析確認，免費重新優化設計，挑選合成5條crRNA并提供實驗技術指導。
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? crRNA設計合成：靶向目的DNA序列??
riboEDIT Designed crRNA采用優化的生物信息學設計，包含20個與目標DNA序列互補配對的核苷酸（原間隔序列）和與tracrRNA互補配對的重復序列，涵蓋人類和小鼠基因（其他物種需評估），每個基因設計合成3-6段單獨的sgRNA，經過嚴格的PAGE純化。
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? 通用型tracrRNA：與crRNA形成gRNA ?
riboEDIT tracrRNA采用化學合成通用型tracrRNA，經PAGE純化，能夠抗核酸酶，能與crRNA結合形成crRNA/tracrRNA復合物，共同指導Cas9蛋白切割雙鏈DNA。需要注意的是，riboEDIT tracrRNA與riboEDIT crRNA是專利配套體系，兩者必須配套使用（不兼容其他體系的crRNA）。
? Cas9 mRNA：瞬時表達Cas9蛋白??
riboEDIT Cas9 mRNA為體外轉錄生成，采用優化的加帽技術可實現高效且經濟的共轉錄加帽以生成Ribo-Cap1結構，從而提高mRNA活性并降低免疫原性。此外，還針對IVT mRNA結構元件（5’UTR、3’UTR、編碼區和poly A尾）進行了優化，使得優化后的mRNA結構系統地提高了其胞內穩定性和翻譯效率。
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Cas9 mRNA可在細胞內瞬時表達Cas9蛋白，在crRNA和tracrRNA復合物指導下對目的DNA序列進行剪切，相比質?；虿《倔w系，有效地降低CRISPR基因編輯的脫靶效應，適用于哺乳動物細胞基因編輯。
圖2. riboEDIT Cas9 Expression mRNA具有高效的基因組剪切效率
MHCC97H細胞共轉染10pmol riboEDIT crRNA、10pmol riboEDIT tracrRNA和1ug riboEDIT Cas9 mRNA，48小時后 riboEDIT T7EI Enzyme酶切檢測靶位點的剪切效率，候選7個靶基因的剪切條帶及編輯效率。如圖所示，#1#2表示同一基因不同位點設計的2條crRNA。
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? T7E1 Enzyme酶：檢測編輯效率??
riboEDIT T7EI Enzymes是經E.coli重組表達的結構特異性酶，可識別并切割非完全配對的雙鏈DNA、十字形結構DNA、 Holliday交叉DNA、異源雙鏈DNA，或緩慢地切割帶有切刻的雙鏈DNA；可有效識別大于1個堿基的基因錯配，廣泛應用于由CRISPR-Cas9、鋅指核酸酶(ZFNs)、轉錄激活因子樣效應物核酸酶(TALENs)等工程核酸酶所介導的基因突變檢測。
圖3. Agilent 2200 Tape Station檢測T7EI酶切后的DNA片段
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| 產品訂購信息 | |||
| 產品編號 | 產品名稱 | 目錄價 | |
| crG00001 | riboEDIT CRISPR-Cas9 mRNA Guarantee Set, 20T（基因編輯效率保證套裝） | ￥15,990.00 | |
| CR-NRA-1 | riboEDIT Designed crRNA（設計合成crRNA） | 詢價 | |
| crT00001-5 | riboEDIT tracrRNA, 5nmol | ￥628.00 | |
| C11057-1 | riboEDIT Cas9 mRNA (0.5ug/ul), 20ug | ￥2,950.00 | |
| C11054-1 | riboEDIT T7EI Enzyme (10U/ul)，100U | ￥880.00 | |
| C11055-1 | riboFECT mRNA Transfection Reagent, 75ul | ￥800.00 | |
| C11062-1 | riboFECT EGFP mRNA for Transfection Control,500ng/μL, 10ug | ￥1,200.00 | |
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