In vivo siRNA給藥方法大致分為系統給藥（如靜脈給藥、腹腔給藥等）和局部給藥（如皮下注射，玻璃體給藥，鞘內給藥等）。siRNA系統給藥每次注射5~20nmol/20g體重，局部給藥則需每次注射1~5nmol/20g體重, 給藥頻率往往是一周2~3次，也可根據實驗方案靈活設定給藥劑量和頻次，探索更佳的實驗條件。
首先需要根據動物模型和實驗方案，確定給藥量和給藥次數，然后計算出實驗所需的總用量。需要根據不同的器官來選擇給藥方法，而給藥量因不同給藥方法和實驗目的而異。如肝臟、腎臟、肌肉等常用靜脈注射（系統給藥）；而皮下腫瘤則常用到瘤內注射（局部給藥）。
局部給藥（Local administration）
適用范圍：淺表器官和組織，包括眼、肺、腦、肌肉、皮下組織、葉鞘組織等。
特點：最直接最常用的導入方式，siRNA 的導入效率較高，用量少，siRNA 能很快被吸收。因此，genOFFTM?in vivo siRNA 在局部注射的應用中更有優勢。
系統給藥（Systemic administration）
適用范圍：siRNA 具有廣泛的組織分布，包括心、肝、腎、肺等。
特點：一些無法通過局部給藥方式到達的靶位，如深入的內臟器官和一些散在分布的靶位（如淋巴細胞，轉移性腫瘤細胞等），一般使用系統注射方式。
本期文章小編給大家帶來了幾篇關于in vivo siRNA給藥方式的客戶應用案例，我們也將不定時地更新更多in vivo siRNA在動物體內的應用策略，希望能夠對正在或即將要做動物實驗的各位小伙伴有一定的幫助！
應用案例1：
Advanced Science (IF15.841)丨Aldehyde Dehydrogenase 2 Mediates Alcohol-Induced Colorectal Cancer Immune Escape through Stabilizing PD-L1 Expression
?
?
研究模型：結直腸癌（將懸浮在PBS中的結腸癌CT26 細胞（3×105）皮下注射到具有免疫活性的BALB/c小鼠（5-6周齡，雌性）或免疫功能不全的NSG小鼠（6周齡）右側，以構建結直腸癌研究模型）
動物模型：荷瘤小鼠模型（當腫瘤達到≈50mm3時，將小鼠隨機分為4組，分別為對照組、PD-1治療組、si-ALDH2組和si-ALDH2+PD-1治療組）
給藥方式：瘤內注射
給藥劑量：10 nmol（siRNA溶于50 ?L生理鹽水緩沖液中）
給藥頻率：每3天一次，持續注射4次
Fig1. 瘤內注射si-ALDH2增強了 CT26 腫瘤模型中PD-1阻斷的功效
參考文獻：Zhang H, Xia Y, Wang F, et al. Aldehyde Dehydrogenase 2 Mediates Alcohol‐Induced Colorectal Cancer Immune Escape through Stabilizing PD‐L1 Expression[J].?Advanced Science, 2021: 2003404.
應用案例2：
Signal Transduction and Targeted Therapy (IF13.494)丨UBQLN1 mediates sorafenib resistance through regulating mitochondrial biogenesis and ROS homeostasis by targeting PGC1β in hepatocellular carcinoma
?
?
研究模型：肝細胞癌（將HepG2或HCCLM3細胞通過皮下植入到4周齡BALB/c裸鼠體內，構建了兩種皮下細胞衍生的 HCC 小鼠模型，所有小鼠在實驗期間都接受30 mg/kg/d的索拉非尼處理）
動物模型：荷瘤小鼠模型（當腫瘤直徑達到~3mm時，將小鼠隨機分為2組：UBQLN1下調組和對照組）
給藥方式：瘤內注射
給藥劑量：5nmol
給藥頻率：每周2次，注射2周
Fig2. 瘤內注射si- UBQLN1使得HepG2和HCCLM3異種移植物對索拉非尼治療重新敏感
參考文獻：Xu J, Ji L, Ruan Y, et al. UBQLN1 mediates sorafenib resistance through regulating mitochondrial biogenesis and ROS homeostasis by targeting PGC1β in hepatocellular carcinoma[J].?Signal Transduction and Targeted Therapy, 2021, 6(1): 1-13.
應用案例3：
Molecular Cell（IF15.584）丨LncRNA CamK-A Regulates Ca2+-Signaling-Mediated Tumor Microenvironment Remodeling
研究模型：乳腺癌（從三陰性乳腺癌患者中產生CamK-A高表達的PDX腫瘤，并立即將組織植入、擴大和皮下植入年齡匹配的無胸腺雌性裸鼠的乳腺脂肪墊中，以構建乳腺癌研究模型）
動物模型：荷瘤小鼠（隨機分為3組，分別注射CamK-A si#1、CamK-A si#2、si-CTL）
給藥方式：瘤內注射
給藥劑量：5 nmol/kg（CamK-A siRNA及對照siRNA溶于稀釋水中）
給藥頻率：每3天注射一次，持續7周
Fig3. 抑制CamK-A對人PDX模型的治療效果
參考文獻：Sang L, Ju H, Liu G, et al. LncRNA CamK-A regulates Ca2+-signaling-mediated tumor microenvironment remodeling[J].?Molecular cell, 2018, 72(1): 71-83. e7.
應用案例4：
Journal ofNeuroinflammation (IF5.793)丨Inhibition of MLKL-dependent necroptosis via downregulatinginterleukin-1R1 contributes to neuroprotection of hypoxic preconditioning intransient global cerebral ischemic rats
研究模型：短暫性全腦缺血（采用四血管阻斷法誘導大鼠短暫性全腦缺血（tGCI），具體步驟詳見文章材料與方法）
動物模型：短暫性全腦缺血大鼠模型（根據處理的不同將大鼠分為3組：tGCI組、HPC組（低氧預適應組）和Sham組（假手術組，除頸總動脈閉塞外，其余手術過程相同），每組又分為MLKL-siRNA組和對照組）
給藥方式：海馬CA1區雙側注射
給藥劑量：10μl MLKL siRNA (2μmol/L)
給藥頻率：對于Sham組，在手術后24h注射1次；對于tGCI組和HPC組，在缺血前24h注射1次
Fig4. 海馬內注射MLKL-siRNA可減輕tGCI誘導的CA1神經元損傷
參考文獻：Zhan L, Lu X, Xu W, et al. Inhibition of MLKL-dependent necroptosis via downregulating interleukin-1R1 contributes to neuroprotection of hypoxic preconditioning in transient global cerebral ischemic rats[J].?Journal of neuroinflammation, 2021, 18(1): 1-15.
應用案例5：
PLoS genetics (IF5.171)丨Physiological and genetic convergence supports hypoxia resistance in high-altitude songbirds
?
?
研究模型：缺氧耐受性（高海拔鳴禽（鳥類）被捕獲后，在實驗室適應約14天，然后將15只體重相近的個體隨機分為3組進行缺氧試驗。缺氧試驗中，使用缺氧室控制常壓狀態下(20.9kPa)的氧濃度，隨后將氧濃度由常氧(20.9%)逐漸降低到低氧(9%)，以構建缺氧耐受性環境）
動物模型：高海拔鳴禽模型（根據處理的不同將鳥類分為3組，每組5只：EPAS1 siRNA組、MEF2C+EPAS1 siRNAs組和對照組）
給藥方式：胸大肌2毫米深垂直注射（注射部位靠近鳥脊約0.5 cm）
給藥劑量：1nmol
給藥頻率：每3天注射1次，持續15天
Fig5. 胸大肌注射EPAS1 siRNA或MEF2C+EPAS1 siRNAs導致鳥類肌纖維明顯增大、肌原纖維直徑較小、線粒體發生嚴重的自噬
參考文獻：Xiong Y, Fan L, Hao Y, et al. Physiological and genetic convergence supports hypoxia resistance in high-altitude songbirds[J].?PLoS genetics, 2020, 16(12): e1009270.
應用案例6：
Theranostics（IF8.579）丨Identification of a novel microRNA-141-3p/Forkhead box C1/β-catenin axis associated with rheumatoid arthritis synovial fibroblast function in vivo and in vitro
?
?
研究模型：關節炎（在第0天和第7天，通過在尾巴底部（0.1 mL）和背部兩個部位（每個部位0.2 mL）注射在弗氏不完全佐劑中乳化的牛II型膠原蛋白來建立膠原蛋白誘發的關節炎（CIA））
動物模型：CIA大鼠模型（總共分6組，第一組：無治療，正常對照；第二組：CIA模型對照，無其他治療；第三組：注射動物用siFoxC1；第四組：注射siControl；第五組：注射miR-141-3p agomir；第六組：注射agomir NC）
給藥方式：踝關節內注射
給藥劑量：5 nmol（siRNA溶于0.9%生理鹽水中，30μL體積）
給藥頻率：每周一次，持續3周
Fig6. 踝關節內注射miR-141-3p agomir/FoxC1特異性siRNA阻礙了大鼠膠原誘導性關節炎（CIA）的發展
參考文獻：Wang J, Wang Y, Zhang H, et al. Identification of a novel microRNA-141-3p/Forkhead box C1/β-catenin axis associated with rheumatoid arthritis synovial fibroblast function in vivo and in vitro[J].?Theranostics, 2020, 10(12): 5412.
應用案例7：
Cancer Cell International (IF4.176)丨Vesicle transporter GOLT1B mediates the cell membrane localization of DVL2 and PD-L2 and promotes colorectal cancer metastasis
?
?
研究模型：結直腸癌（將新鮮切除的結直腸癌腫瘤組織接種于血供豐富的BALB/c裸鼠右前腋窩，構建PDX模型）
動物模型：PDX模型（接種2周后，將小鼠分為2組：處理組（siGOLT1B）和對照組（si-control），觀察并記錄體重和腫瘤大?。?/p>
給藥方式：腹腔注射
給藥劑量：1nmol
給藥頻率：每2天注射1次，持續4周
Fig7. 腹腔注射siGOLT1B可抑制PDX模型腫瘤進展
參考文獻：Liu T, Liu B, Liu Y, et al. Vesicle transporter GOLT1B mediates the cell membrane localization of DVL2 and PD-L2 and promotes colorectal cancer metastasis[J].?Cancer Cell International, 2021, 21(1): 1-15.
更多動物用siRNA應用案例持續更新中，敬請期待……
