MicrOFFTM?miRNA antagomir是經過特殊化學修飾的miRNA拮抗劑，可直接注射于動物體內，用于抑制內源性miRNA。與普通抑制劑相比，動物用miRNA antagomir具有更高的穩定性和抑制效果，更易通過細胞膜、細胞間隙而富集于靶細胞。在動物實驗中antagomir通?？梢酝ㄟ^系統或局部注射等方法進行給藥。關于科研實驗中的給藥方式一般沒有固定的模式，給藥方式應該根據具體的實驗靈活設計，在實際實驗過程中不斷調整調整和優化。
本期文章小編給大家帶來的是關于動物用miRNA antagomir給藥方式的客戶應用案例，我們也將不定時地更新更多miRNA antagomir在動物體內的應用策略，希望能夠對正在或即將要做動物實驗的各位小伙伴有一定的幫助！
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銳博生物miRNA antagomir
中文名：miRNA拮抗劑
功能：抑制內源性的miRNA
純化方式：in vivo（又稱Standard in vivo）
穩定性：經特殊化學修飾，穩定性高
給藥方式：局部給藥(5-20 nmol)；系統給藥(50-200 nmol)
作用方式：單鏈RNA，通過與體內的成熟miRNA強競爭性結合，阻止miRNA與其靶基因mRNA的互補配對，抑制miRNA發揮作用
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應用案例1：
Journal of Hepatology（IF20.582）丨Hepatocyte-derived extracellular vesicles promote endothelial inflammation and atherogenesis via microRNA-1
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研究模型：非酒精性脂肪性肝病、動脈粥樣硬化（對6-8周齡雄性ApoE-/-小鼠連續喂食高脂飲食[ HFD，包含60 kcal％脂肪、20％蛋白質和20％碳水化合物 ]10周，以構建伴有脂肪肝的動脈粥樣硬化疾病模型）
動物模型：高脂飲食ApoE-/-小鼠（實驗組：注射antagomiR-1；對照組：注射scramble antagomiR）
給藥方式：腹腔注射
給藥劑量：20 mg/kg wt（antagomir稀釋于0.2 ml生理鹽水中）
給藥頻率：每周一次，共注射6周
Fig1. 抑制miR-1對ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化的影響
參考文獻：Jiang F, Chen Q, Wang W, et al. Hepatocyte-derived extracellular vesicles promote endothelial inflammation and atherogenesis via microRNA-1[J].?Journal of hepatology, 2020, 72(1): 156-166.
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應用案例2：
Molecular Cancer（IF15.302）丨LINC00173.v1 promotes angiogenesis and progression of lung squamous cell carcinoma by sponging miR-511-5p to regulate VEGFA expression
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研究模型：肺鱗狀細胞癌（至少6-8只4-6周齡BALB/c-nu小鼠，每組隨機分配不同體重的小鼠。移植腫瘤實驗，將1-4×106個NCI-H1975細胞皮下注射接種于裸鼠腹股溝褶，以構建異種移植裸鼠模型。7天后，NCI-H1975–LINC00173.v1接種小鼠隨機分為3組進行后續試驗）
動物模型：異種移植裸鼠模型（隨機分為3組，分別為貝伐單抗組、antagomir-511-5p組和對照組）
給藥方式：腹腔注射
給藥劑量：10?μmol
給藥頻率：每周1次，共4周
Fig2. 注射antagomir-511-5p消除了LINC00173.v1下調對NCI-H520細胞的腫瘤發生和CD31+ LBV密度的抑制作用
參考文獻：Chen J, Liu A, Wang Z, et al. LINC00173. v1 promotes angiogenesis and progression of lung squamous cell carcinoma by sponging miR-511-5p to regulate VEGFA expression[J].?Molecular cancer, 2020, 19: 1-19.
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應用案例3：
Nature Communications（IF12.121）丨CircAnks1a in the spinal cord regulates hypersensitivity in a rodent model of neuropathic pain
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研究模型：采用L5/L6脊神經結扎的方法制備大鼠神經性疼痛模型。在注射戊巴比妥鈉（50 mg kg-1，i.p.）后，將聚乙烯10（PE10）導管植入L5/L6椎間蛛網膜下腔中；導管尖端定位在L4–L6脊髓節段水平之間。然后使大鼠恢復5天。表現出后肢麻痹或癱瘓的動物被排除在研究之外。
動物模型：SNL（脊神經結扎）處理大鼠（實驗組：注射antagomir或agomir；對照組：注射antagomir control或agomir control）
給藥方式：鞘內注射
給藥劑量：1nmol/d antagomir；1nmol/d agomir
給藥頻率：每天一次，連續注射5天
Fig3. CircAnks1a通過靶向miR-324-3p調控VEGFB的表達
參考文獻：Zhang S B, Lin S Y, Liu M, et al. CircAnks1a in the spinal cord regulates hypersensitivity in a rodent model of neuropathic pain[J].?Nature communications, 2019, 10(1): 1-16.
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應用案例4：
Nature Communications（IF12.121）丨Circulating myocardial microRNAs from infarcted hearts are carried in exosomes and mobilise bone marrow progenitor cells
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研究模型：急性心肌梗死（對于AMI手術誘導，通過腹膜內注射無菌戊巴比妥鈉（50 mg/kg?bw）麻醉小鼠。經氣管插管和機械通氣后，通過左肋間開胸術打開小鼠胸部。由冠狀動脈左前降支(LAD)永久結扎誘導AMI，假手術動物完成除LAD結扎外的所有手術）
動物模型：AMI小鼠模型（實驗組：注射miR-1a、miR-208a、miR-133a、miR-499-5p antagomir；對照組：注射antagomir NC）
給藥方式：尾靜脈注射
給藥劑量：總共80mg/kg?bw antagomiRs（miR-1a、miR-208a、miR-133a、miR-499-5p各20mg）
給藥頻率：4種antagomiRs分別注射，間隔1 h，每天1次，連續注射3天
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Fig4. 外泌體供體小鼠經antagomirs預處理后減弱了CXCR4表達水平的降低，且antagomir-AMI-外泌體處理小鼠PB中集落形成的PCs沒有增加
參考文獻：Cheng M, Yang J, Zhao X, et al. Circulating myocardial microRNAs from infarcted hearts are carried in exosomes and mobilise bone marrow progenitor cells[J].?Nature communications, 2019, 10(1): 1-9.
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應用案例5：
Nature Communications（IF12.121）丨MicroRNA-27a controls the intracellular survival of Mycobacterium tuberculosis by regulating calcium-associated autophagy
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研究模型：肺結核、自噬（首先通過CRISPR/Cas9方法構建miR-27a-/-小鼠模型，然后將WT和miR-27a-/-小鼠模型通過氣溶膠途徑感染結核分枝桿菌14天，構建Mtb感染小鼠模型）
動物模型：Mtb感染小鼠模型（實驗組：注射miR-27a antagomir；對照組：注射antagomir NC）
給藥方式：腹腔注射
給藥劑量：5?mg/kg
給藥頻率：小鼠感染結核分枝桿菌14天后，隔天注射antagomir，處理14天
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Fig5. miR-27a antagomir處理可導致WT小鼠肺部的細菌負荷和病理損傷減少，但在miR-27a-/-小鼠中沒有
參考文獻：Liu F, Chen J, Wang P, et al. MicroRNA-27a controls the intracellular survival of Mycobacterium tuberculosis by regulating calcium-associated autophagy[J].?Nature communications, 2018, 9(1): 1-14.
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應用案例6：
Theranostics（IF8.576）丨Inhibition of miR-331-3p and miR-9-5p ameliorates Alzheimer’s disease by enhancing autophagy
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疾病模型：阿爾茨海默氏癥（APPswe/PS1dE9小鼠從南京大學模型動物研究中心獲得，作為本研究的AD小鼠模型）
動物模型：AD小鼠模型（實驗組：miR-331-3p和miR-9-5p antagomir處理；對照組：control antagomir處理）
給藥方式：海馬區注射
給藥劑量：2.0μL antagomir（50μM）
給藥頻率：注射1次
Fig6. 注射miR-331-3p和miR-9-5p antagomir可改善AD小鼠的認知能力下降和異?；顒幽芰?/strong>
參考文獻：Chen M L, Hong C G, Yue T, et al. Inhibition of miR-331-3p and miR-9-5p ameliorates Alzheimer’s disease by enhancing autophagy[J].?Theranostics, 2021, 11(5): 2395.
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應用案例7：
JCI Insight（IF6.206）丨Epithelial miR-206 targets CD39/extracellular ATP to upregulate airway IL-25 and TSLP in type 2-high asthma
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疾病模型：哮喘（采用HDM敏化和激發的方法建立動物模型。即雌性C57BL/6小鼠在第0、7和14天通過腹腔注射100μL凍干HDM提取物溶液（0.1 mg/mL）和Al(OH)3佐劑，并在第21、22和23天鼻腔給藥40μL HDM溶液(3 mg/mL)或生理鹽水。第20天和第22天鼻腔給藥miR-206 antagomir、對照antagomir）
動物模型：變應性氣道炎癥小鼠模型（實驗組：miR-206 antagomir處理；對照組：control antagomir處理）
給藥方式：鼻腔給藥
給藥劑量：20nmol（antagomir稀釋于40μL生理鹽水中）
給藥頻率：第20天、22天給藥
Fig7. 鼻腔給藥miR-206 antagomir進一步增加了HDM誘導的Cd39表達，并抑制了HDM誘導的BALF ATP積累
參考文獻：Zhang K, Feng Y, Liang Y, et al. Epithelial microRNA-206 targets CD39/extracellular ATP to upregulate airway IL-25 and TSLP in type 2-high asthma[J].?JCI insight, 2021.
更多動物用miRNA antagomir應用案例持續更新中，敬請期待……
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