石蠟包埋組織樣品制備方法

組織采集后，經固定、保存、石蠟包埋、切片、展片、烤片，方可進行HE染色(或其它化學染料染色)及免疫抗體標記。

以下操作依據組織大小及致密程度而定

1、組織的采集、固定和保存：

可依據實驗目的及組織的特點而考慮采用不同的固定和保存方法。此處只介紹實驗室常用方法。
采取組織后，4%多聚甲醛(4%PFA)4°C 固定1小時(根據組織大小和致密程度調整固定時間)或過夜，PBS緩沖液洗三次，每次10min至1小時，于30%、50%乙醇中各10 min至1小時，4°C保存于70%乙醇中。

2、組織的包埋、切片、展片及保存：

固定后的樣品經梯度乙醇脫水、二甲苯透明，52-54°C石蠟包埋，常規切片，切片厚4 -10mm，貼于處理過的干凈載玻片上，34°C烤片過夜，之后收集于載片盒中，4°C密封保存。

石蠟包埋：

3、石蠟組織切片的化學熒光標記：

切片經二甲苯脫蠟、梯度乙醇復水，即可進行免疫反應，操作步驟與冰凍組織切片的反應方法相同。
石蠟組織切片脫蠟、復水步驟：

4、石蠟組織切片的免疫標記：

切片經二甲苯脫蠟、梯度乙醇復水，即可進行免疫反應，操作步驟與冰凍組織切片的反應方法相同。
石蠟組織切片脫蠟、復水步驟：

5、石蠟組織切片的HE染色：

切片經二甲苯脫蠟、梯度乙醇復水，于蘇木精中室溫染色5-20 min，迅速用水沖洗切片，至組織切片變藍，鏡檢。用0.1-0.5%鹽酸乙醇分色1～2秒鐘，也可用50ml H₂O中加一滴氨水分色，效果亦好(如染色程度恰好，也可省略分色步驟)。之后用流水沖洗切片，直至切片變藍，此稱藍化。切片經梯度乙醇至95%乙醇中，于0.5%伊紅中染色1～5秒或更長時間，95%乙醇洗去殘色，若顏色太深，可在低濃度的乙醇中脫色，鏡檢。無水乙醇脫水、二甲苯透明，中性樹膠封片。普通光鏡觀察，室溫干燥條件下保存染色切片。