In vivo siRNA最關鍵的問題就是siRNA穩定性及給藥策略，適當的化學修飾是解決siRNA穩定的重要方法之一。銳博生物研發的genOFFTM in vivo siRNA，采用特殊的化學修飾方式，大大提高了siRNA的血清穩定性，并保持了siRNA的高效活性；通過采用國際先進的處理方法，能夠最大限度降低對實驗動物的毒性。
In vivo siRNA給藥方法大致分為系統給藥（如靜脈給藥、腹腔給藥等）和局部給藥（如皮下注射，玻璃體給藥，鞘內給藥等）。siRNA系統給藥每次注射5~20nmol/20g體重，局部給藥則需每次注射1~5nmol/20g體重, 給藥頻率往往是一周2~3次，也可根據實驗方案靈活設定給藥劑量和頻次，探索更佳的實驗條件。
首先需要根據動物模型和實驗方案，確定給藥量和給藥次數，然后計算出實驗所需的總用量。需要根據不同的器官來選擇給藥方法，而給藥量因不同給藥方法和實驗目的而異。如肝臟、腎臟、肌肉等常用靜脈注射（系統給藥）；而皮下腫瘤則常用到瘤內注射（局部給藥）。
局部給藥（Local administration）
適用范圍：淺表器官和組織，包括眼、肺、腦、肌肉、皮下組織、葉鞘組織等。
特點：最直接最常用的導入方式，siRNA 的導入效率較高，用量少，siRNA 能很快被吸收。因此，genOFFTM in vivo siRNA 在局部注射的應用中更有優勢。
系統給藥（Systemic administration）
適用范圍：siRNA 具有廣泛的組織分布，包括心、肝、腎、肺等。
特點：一些無法通過局部給藥方式到達的靶位，如深入的內臟器官和一些散在分布的靶位（如淋巴細胞，轉移性腫瘤細胞等），一般使用系統注射方式。
小編之前已經給大家整理一些關于動物用siRNA產品的客戶應用案例，詳情請見：
1、動物用siRNA案例應用策略解析(20210609)丨含動物造模、實驗處理、給藥方式、給藥劑量……
2、【更新】動物用siRNA案例應用策略解析(20211015)丨含給藥方式、給藥劑量、動物造模、實驗處理……
本期文章小編給大家更新了幾篇關于in vivo siRNA給藥方式的客戶應用案例，希望能夠對正在或即將要做動物實驗的各位小伙伴有一定的幫助！
應用案例1：
Molecular Cancer（IF27.401）丨ciRS-7 is a prognostic biomarker and potential gene therapy target for renal cell carcinoma
研究模型：腎細胞癌（選擇4周齡雄性M-NSG小鼠作為研究對象，將5×107個OE-ciRS-7穩定表達的786-O細胞通過皮下注射到小鼠體內，以構建皮下異種移植腫瘤模型；將1×106個OE-ciRS-7穩定表達的786-O細胞通過尾靜脈注射到小鼠體內，以構建肺轉移小鼠模型）
動物模型：異種移植腫瘤模型、肺轉移小模型鼠（分為3組，分別注射saline、si-ciRS-7、PBAE/si-ciRS-7納米復合物）
給藥方式：瘤內注射、尾靜脈注射
給藥劑量：10nM
給藥頻率：每周注射2次，注射3周
Fig1. 體內遞送si-ciRS-7可抑制RCC腫瘤生長和轉移
參考文獻：Mao W, Wang K, Xu B, et al. ciRS-7 is a prognostic biomarker and potential gene therapy target for renal cell carcinoma[J]. Molecular cancer, 2021, 20(1): 1-7.
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應用案例2：
Signal Transduction and Targeted Therapy（IF18.187）丨Phosphorylated NFS1 weakens oxaliplatin-based chemosensitivity of colorectal cancer by preventing PANoptosis
研究模型：結直腸癌（將兩名CRC患者的新鮮腫瘤樣本皮下植入小鼠背側作為第一代（F0）。 一旦達到適當的體積，就將腫瘤切除，分成等份，并皮下植入裸鼠體內作為第二代（F1）。以構建結直腸癌PDX小鼠模型。當腫瘤變得可觸及時，將荷瘤小鼠隨機分為四組）
動物模型：結直腸癌PDX小鼠模型（分為4組，分別注射NFS1 siRNA+奧沙利鉑、control siRNA+奧沙利鉑、NFS1 siRNA+PBS、control siRNA+PBS）
給藥方式：瘤內注射
給藥劑量：5nmol
給藥頻率：/
Fig2.注射NFS1 siRNA可增強奧沙利鉑體內抗腫瘤作用
參考文獻：Lin J F, Hu P S, Wang Y Y, et al. Phosphorylated NFS1 weakens oxaliplatin-based chemosensitivity of colorectal cancer by preventing PANoptosis[J]. Signal transduction and targeted therapy, 2022, 7(1): 1-16.
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應用案例3：
Journal of Hematology & Oncology（IF17.388）丨Circular RNA circHERC4 as a novel oncogenic driver to promote tumor metastasis via the miR-556-5p/CTBP2/E-cadherin axis in colorectal cancer
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研究模型：結直腸癌（選擇4周齡雌性BALB/c裸鼠，將1×107穩定表達pLCDH-vector或pLCDH-circHERC4的SW480細胞通過上背注射或尾靜脈注射到裸鼠體內，構建皮下異種移植腫瘤模型和CRC轉移小鼠模型）
動物模型：異種移植腫瘤模型和CRC轉移小鼠模型（分為4組，分別為circHERC4 OE + CTBP2 siRNA、circHERC4 OE + miR-556-5p mimic、對照組vector和circHERC4 OE）
給藥方式：瘤內注射和尾靜脈注射
給藥劑量：1nmol和5nmol
給藥頻率：每周2次，注射60天后處死小鼠
Fig3. 注射CTBP2 siRNA或miR-556-5p mimic后可抑制circHERC4過表達導致的腫瘤生長加速、以及肺和肝轉移結節的形成，阻礙circHERC4誘導的致癌作用
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參考文獻：He J, Chu Z, Lai W, et al. Circular RNA circHERC4 as a novel oncogenic driver to promote tumor metastasis via the miR-556-5p/CTBP2/E-cadherin axis in colorectal cancer[J]. Journal of hematology & oncology, 2021, 14(1): 1-20.
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應用案例4：
Autophagy（16.016）丨m6A reader YTHDC1 modulates autophagy by targeting SQSTM1 in diabetic skin
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研究模型：糖尿病性皮膚（使用7-8周齡雄性2型糖尿病小鼠（BKD-Leprem2Cd479/Nju, db/db）和年齡匹配的野生型WT小鼠作為研究對象。在產生皮膚創面前2天（第-2天），使用6mm皮膚活檢打孔器在小鼠背部標記一個圓圈。然后，WT-si-NC、WT-si-Ythdc1和WT-si-Sqstm1組在圓圈上皮內注射相應的siRNAs（si-NC、si-Ythdc1或si-Sqstm1）。2天后（第0天），用6mm皮膚活檢打孔器制作圓形全層皮膚創面，并從創面收獲皮膚組織。在創面建模后的第0、2、4和6天，WT-si-NC、WT-si-Ythdc1和WT-si-Sqstm1組皮內注射相應的siRNA（si-NC、si-Ythdc1或si- Sqstm1）于圓形創面邊緣）
動物模型：糖尿病性皮膚創面愈合小鼠模型（分為3組，分別注射si-NC、si-Ythdc1或si- Sqstm1）
給藥方式：皮內注射
給藥劑量：2.5 nmol
給藥頻率：分別在產生皮膚創面前2天、創面建模后第0、2、4和6天注射1次
Fig4. 注射si-Ythdc1或si-Sqstm1可導致小鼠皮膚中的創面愈合延遲（WT-si-NC: 78.822 ± 2.386%; WT-si-Ythdc1: 71.100 ± 1.888%; WT-si-Sqstm1: 70.176 ± 1.789%）
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參考文獻：Liang D, Lin W J, Ren M, et al. m6A reader YTHDC1 modulates autophagy by targeting SQSTM1 in diabetic skin[J]. Autophagy, 2021: 1-20.
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應用案例5：
Cancer Research（IF12.701）丨Aberrant Nuclear Export of circNCOR1 Underlies SMAD7-Mediated Lymph Node Metastasis of Bladder Cancer
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研究模型：膀胱癌（將兩名膀胱癌患者的新鮮BCa樣本作為皮下腫瘤植入4周齡NSG小鼠體內，即第一代F1；然后將F1小鼠的異種移植物切成小塊并移植到F2小鼠中；當腫瘤達到1.5cm3時，將它們切除并分成等體積的塊并移植到F3小鼠中。當PDX約為200mm3時，將F3小鼠隨機分組）
動物模型：PDX小鼠模型（分為4組，分別注射Vector、體內優化的siSMAD7試劑、circNCOR1慢病毒、體內優化的siTGFBR1試劑）
給藥方式：瘤內注射
給藥劑量：/
給藥頻率：每天注射一次，每5天停藥一次，給藥36天后處死小鼠
Fig5. 注射體內優化的siTGFBR1試劑顯著抑制了PDX模型腫瘤體積生長，注射siSMAD7則得到相反的效果
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參考文獻：An M, Zheng H, Huang J, et al. Aberrant Nuclear Export of circNCOR1 Underlies SMAD7-Mediated Lymph Node Metastasis of Bladder Cancer[J]. Cancer Research, 2022.
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應用案例6：
Cancer Research（IF12.701）丨N6-methyladenosine–Mediated Upregulation of WTAPP1 Promotes WTAP Translation and Wnt Signaling to Facilitate Pancreatic Cancer Progression
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研究模型：胰腺癌（將2×106 PDAC細胞通過皮下注射到5周齡雌性BALB/c裸鼠體內，以構建異種移植裸鼠模型；將三名患者的新鮮PDAC樣本作為皮下腫瘤植入4周齡NSG小鼠體內，即第一代F1；然后將F1小鼠的異種移植物切成小塊并移植到F2小鼠中；當腫瘤達到1.5cm3時，將它們切除并分成等體積的塊并移植到F3小鼠中，以構建PDX小鼠模型）
動物模型：胰腺癌異種移植裸鼠模型和PDX小鼠模型（分為2組，分別注射siControl、siWTAPP1）
給藥方式：靜脈注射
給藥劑量：75 mg/kg
給藥頻率：前3天每天進行注射一次，之后3天注射一次，持續3周
Fig6. 異種移植裸鼠模型注射siWTAPP1顯著降低了腫瘤負荷并延長了小鼠的存活時間；PDX模型給藥siWTAPP1顯著降低了PDX生長率，且siWTAPP1試劑對小鼠無明顯毒性，因小鼠體重未顯著降低
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參考文獻：Deng J, Zhang J, Ye Y, et al. N6-methyladenosine–Mediated Upregulation of WTAPP1 Promotes WTAP Translation and Wnt Signaling to Facilitate Pancreatic Cancer Progression[J]. Cancer Research, 2021, 81(20): 5268-5283.
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應用案例7：
Journal of Experimental & Clinical Cancer Research（IF11.161）丨circCUL2 induces an inflammatory CAF phenotype in pancreatic ductal adenocarcinoma via the activation of the MyD88-dependent NF-κB signaling pathway
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研究模型：胰腺導管腺癌（將3名患者的新鮮PDAC樣本皮下植入4周齡NSG小鼠體內，即F1代；然后從F1小鼠中取出異種移植物，切成小塊并重新移植到其他小鼠F2。當腫瘤達到約1500mm3時，將其切除并再次切成小塊，重新植入其他小鼠F3。7天后異種移植物達到約100mm3，將F3小鼠隨機分為3組）
動物模型：胰腺導管腺癌PDX小鼠模型（分為3組，分別注射si-Control、si-circCUL2、針對IL6的中和抗體）
給藥方式：靜脈注射
給藥劑量：50mg/kg
給藥頻率：每3天一次，持續3周
Fig7. 注射si-circCUL2和anti-IL6抗體顯著減少了PDX生長
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參考文獻：Zheng S, Hu C, Lin H, et al. circCUL2 induces an inflammatory CAF phenotype in pancreatic ductal adenocarcinoma via the activation of the MyD88-dependent NF-κB signaling pathway[J]. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research, 2022, 41(1): 1-23.
應用案例8：
Journal of Allergy and Clinical Immunology（IF10.793）丨CircZNF652 promotes the goblet cell metaplasia by targeting the miR-452-5p/JAK2 signaling pathway in allergic airway epithelia
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研究模型：哮喘（使用8 周齡雌性BALB/c小鼠構建卵清蛋白OVA誘導的哮喘小鼠模型。簡言之，即第0天和第14天，在所有小鼠的腹股溝、背部、頸部和足墊通過皮下注射20μg/只乳化在2mg氫氧化鋁佐劑中的OVA以進行致敏。從第22天到第28天，致敏小鼠用1% OVA或等體積的0.1 M PBS通過射流霧化器霧化30分鐘，每天一次，每次OVA霧化后2h，對小鼠進行si-mmu-circZNF652處理）
動物模型：過敏原誘導的變應性氣道炎癥小鼠模型（分為3組，分別注射si-NC、1mg/ml siZNF652、3mg/ml siZNF652）
給藥方式：氣管給藥
給藥劑量：1mg/ml或3mg/ml（50ul/只）
給藥頻率：每天1次，共7天
Fig8. 灌注in vivo si-circZNF652-3減弱了過敏性氣道炎癥中的杯狀細胞化生
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參考文獻：Wang X, Xu C, Cai Y, et al. CircZNF652 promotes the goblet cell metaplasia by targeting the miR-452-5p/JAK2 signaling pathway in allergic airway epithelia[J]. Journal of Allergy and Clinical Immunology, 2022.
應用案例9：
Oncogene（IF9.867）丨FGD3 binds with HSF4 to suppress p65 expression and inhibit pancreatic cancer progression
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研究模型：胰腺癌（使用LSL-KrasG12D/+; LSL-Trp53R172H/+; Pdx-1-Cre (KPC)轉基因小鼠作為動物模型）
動物模型：KPC轉基因小鼠模型（分為2組，分別注射siControl、siFGD3）
給藥方式：尾靜脈注射
給藥劑量：500 nmol/kg
給藥頻率：第48天開始注射，每5天注射1次
Fig9. 注射siFGD3導致小鼠體內腫瘤更大
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參考文獻：Guo F, Cheng X, Jing B, et al. FGD3 binds with HSF4 to suppress p65 expression and inhibit pancreatic cancer progression[J]. Oncogene, 2022: 1-14.
更多動物用siRNA應用案例持續更新中，敬請期待……
