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確定細胞轉染效率的高低非常重要,通過特異的核酸轉染指示劑轉染進入細胞核并結合兩種染料,可以精確定量地分析轉染效率及細胞毒性。
riboMONITOR?轉染指示劑試劑盒包含3種染料:riboTRACER? Green、NUCLEOstain?和DEADstain?,分別是用于檢測成功轉染細胞、全部細胞和死亡細胞。其中riboTRACER? Green能夠在轉染后富集于細胞核,不依賴于siRNA或miRNA序列,可方便、快速、準確地定量分析細胞轉染效率,以便對siRNA或miRNA轉染條件做進一步優化。

產品優勢

1、使用方便:僅需3步,熒光顯微鏡觀察即可
2、準確定量:富集于細胞核,精確定量轉染效率
3、毒性分析:可同時分析細胞毒性,優化轉染試劑用量

哪種轉染試劑適合您?
銳博生物提供從siRNA/miRNA、mRNA/長鏈RNA到蛋白質的全系列轉染試劑,請根據下表確定適合您的轉染試劑。
siRNA/miRNA/質粒轉染試劑,基因抑制效率高mRNA/長鏈RNA轉染試劑,適用于原代細胞蛋白質轉染試劑,可實現高效轉染
riboFECT? CP轉染試劑riboFECT? mRNA轉染試劑riboFECT? Protein轉染試劑
試劑規格0.5ml, 1ml0.5ml, 2.5ml0.5ml, 2.5ml
樣品類型siRNA, miRNAmRNA, 長鏈RNA蛋白質
轉染效率很好很好高達98%
細胞活力很好很好
細胞毒性超低超低幾乎無細胞毒性
轉染細胞系(部分)HeLa,A549,HEK293T,HCT-116,NIH/3T3,HepG2,HNE1,
L6,5637,H-bc,HSC,C2C12,Sertoli,CNE-2,5-8F,
HAEC,DRG,CF,THP-1,MEL,PBMC,NSC,MSC,U2OS
human fibroblasts,CHO-K1,B16-F10,HEK293HEK293,B16-F10,COS-7,COLO 205,dendritic cells (DC),
H9c2,human fibroblasts (primary cells),HUVEC (primary cells),
Jurkat,MC3T3-E1,MEF (primary cells),microglia,
mouse podocytes (primary cells),NIH/3T3,SK-OV-3,U-373 MG
技術支持

評價實驗細胞系轉染的難易度

不同細胞系的轉染效率差異很大,如何鑒定目的細胞系是否適合轉染是細胞轉染實驗的基本問題。通常用熒光標記的siRNA或miRNA進行相應的轉染對照試驗,但該類轉染對照不均勻地分布于細胞各處,有時甚至會粘連成團,很難定量分析細胞的轉染效率。riboTRACER?是細胞核富集的核酸指示劑,通過與細胞核染料結合,即可精確定量分析細胞轉染效率和細胞毒性。

圖1 使用riboMONITOR?檢測riboFECT? CP轉染siRNA于不同細胞系的轉染效率

Cells transfected with riboTRACER? Green (100nM) with riboFECT? CP (5 μl/well), fixed with PFA, stain with NUCLEOstain? and DEADstain?, 20X of microscope.

評價轉染試劑的轉染效果與細胞毒性

不同的轉染試劑的轉染效果差別很大,不恰當地選擇轉染試劑使轉染效率低下,甚至導致細胞的大量死亡。riboMONITOR?通過熒光定量檢測成功轉染的細胞、死亡細胞、全部細胞,實現了細胞轉染效率和細胞毒性的同時評估。
圖2 使用riboMONITOR? 轉染指示劑檢測3種轉染試劑轉染293T細胞的轉染效果
Reagent L的轉染試劑細胞毒性較大,易引起細胞大量死亡,Reagent X轉染試劑的轉染效率不高。而riboFECT? CP的轉染效率較高,幾乎無細胞毒性,能夠順利轉染293T細胞。

優化轉染條件,監測轉染效果

轉染試劑用量和細胞密度是轉染實驗成功的關鍵,確保轉染效果的批次間的穩定性,是實驗可重復性的重要保證。riboMONITOR? 通過結合細胞核染料,可快速檢測出細胞的轉染效率,優化最佳的轉染試劑用量及細胞密度,確定最適宜的轉染條件,以實現細胞的高效轉染,減少實驗中不必要的實驗摸索
A-B:采用0.4μl和1μl的Reagent L轉染Hela細胞的轉染效果及細胞毒性檢測;C-D:采用0.4μl和1μl的Reagent L分別進行4萬和5萬細胞的轉染實驗,結果表明采用1μl Reagent L,4萬細胞進行轉染時轉染效率最高(C),細胞毒性最?。―)

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  • Li Z, Zhang C, Wang Z, et al. Lipofectamine 2000/siRNA complexes cause endoplasmic reticulum unfolded protein response in human endothelial cells[J]. Journal of cellular physiology, 2019, 234(11): 21166-21181.
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產品編號 產品名稱目錄價數量操作
C10410-1 riboMONITOR Transfection Indicator Kit(Green),20T¥800.00
C10410-2 riboMONITOR Transfection Indicator Kit(Green),40T¥1,300.00
C10410-5 riboMONITOR Transfection Indicator Kit(Green),100T¥2,400.00

 

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