In vivo siRNA最關(guān)鍵的問(wèn)題就是siRNA穩(wěn)定性及給藥策略，適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)修飾是解決siRNA穩(wěn)定的重要方法之一。銳博生物研發(fā)的genOFFTM in vivo siRNA，采用特殊的化學(xué)修飾方式，大大提高了siRNA的血清穩(wěn)定性，并保持了siRNA的高效活性；通過(guò)采用國(guó)際先進(jìn)的處理方法，能夠最大限度降低對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的毒性。
In vivo siRNA給藥方法大致分為系統(tǒng)給藥（如靜脈給藥、腹腔給藥等）和局部給藥（如皮下注射，玻璃體給藥，鞘內(nèi)給藥等）。siRNA系統(tǒng)給藥每次注射5~20nmol/20g體重，局部給藥則需每次注射1~5nmol/20g體重, 給藥頻率往往是一周2~3次，也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)方案靈活設(shè)定給藥劑量和頻次，探索更佳的實(shí)驗(yàn)條件。
首先需要根據(jù)動(dòng)物模型和實(shí)驗(yàn)方案，確定給藥量和給藥次數(shù)，然后計(jì)算出實(shí)驗(yàn)所需的總用量。需要根據(jù)不同的器官來(lái)選擇給藥方法，而給藥量因不同給藥方法和實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩悺Ｈ绺闻K、腎臟、肌肉等常用靜脈注射（系統(tǒng)給藥）；而皮下腫瘤則常用到瘤內(nèi)注射（局部給藥）。
局部給藥（Local administration）
適用范圍：淺表器官和組織，包括眼、肺、腦、肌肉、皮下組織、葉鞘組織等。
特點(diǎn)：最直接最常用的導(dǎo)入方式，siRNA 的導(dǎo)入效率較高，用量少，siRNA 能很快被吸收。因此，genOFFTM in vivo siRNA 在局部注射的應(yīng)用中更有優(yōu)勢(shì)。
系統(tǒng)給藥（Systemic administration）
適用范圍：siRNA 具有廣泛的組織分布，包括心、肝、腎、肺等。
特點(diǎn)：一些無(wú)法通過(guò)局部給藥方式到達(dá)的靶位，如深入的內(nèi)臟器官和一些散在分布的靶位（如淋巴細(xì)胞，轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞等），一般使用系統(tǒng)注射方式。
小編之前已經(jīng)給大家整理一些關(guān)于動(dòng)物用siRNA產(chǎn)品的客戶應(yīng)用案例，詳情請(qǐng)見(jiàn)：
1、動(dòng)物用siRNA案例應(yīng)用策略解析(20210609)丨含動(dòng)物造模、實(shí)驗(yàn)處理、給藥方式、給藥劑量……
2、【更新】動(dòng)物用siRNA案例應(yīng)用策略解析(20211015)丨含給藥方式、給藥劑量、動(dòng)物造模、實(shí)驗(yàn)處理……
本期文章小編給大家更新了幾篇關(guān)于in vivo siRNA給藥方式的客戶應(yīng)用案例，希望能夠?qū)φ诨蚣磳⒁鰟?dòng)物實(shí)驗(yàn)的各位小伙伴有一定的幫助！
應(yīng)用案例1：
Molecular Cancer（IF27.401）丨ciRS-7 is a prognostic biomarker and potential gene therapy target for renal cell carcinoma
研究模型：腎細(xì)胞癌（選擇4周齡雄性M-NSG小鼠作為研究對(duì)象，將5×107個(gè)OE-ciRS-7穩(wěn)定表達(dá)的786-O細(xì)胞通過(guò)皮下注射到小鼠體內(nèi)，以構(gòu)建皮下異種移植腫瘤模型；將1×106個(gè)OE-ciRS-7穩(wěn)定表達(dá)的786-O細(xì)胞通過(guò)尾靜脈注射到小鼠體內(nèi)，以構(gòu)建肺轉(zhuǎn)移小鼠模型）
動(dòng)物模型：異種移植腫瘤模型、肺轉(zhuǎn)移小模型鼠（分為3組，分別注射saline、si-ciRS-7、PBAE/si-ciRS-7納米復(fù)合物）
給藥方式：瘤內(nèi)注射、尾靜脈注射
給藥劑量：10nM
給藥頻率：每周注射2次，注射3周
Fig1. 體內(nèi)遞送si-ciRS-7可抑制RCC腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移
參考文獻(xiàn)：Mao W, Wang K, Xu B, et al. ciRS-7 is a prognostic biomarker and potential gene therapy target for renal cell carcinoma[J]. Molecular cancer, 2021, 20(1): 1-7.
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應(yīng)用案例2：
Signal Transduction and Targeted Therapy（IF18.187）丨Phosphorylated NFS1 weakens oxaliplatin-based chemosensitivity of colorectal cancer by preventing PANoptosis
研究模型：結(jié)直腸癌（將兩名CRC患者的新鮮腫瘤樣本皮下植入小鼠背側(cè)作為第一代（F0）。 一旦達(dá)到適當(dāng)?shù)捏w積，就將腫瘤切除，分成等份，并皮下植入裸鼠體內(nèi)作為第二代（F1）。以構(gòu)建結(jié)直腸癌PDX小鼠模型。當(dāng)腫瘤變得可觸及時(shí)，將荷瘤小鼠隨機(jī)分為四組）
動(dòng)物模型：結(jié)直腸癌PDX小鼠模型（分為4組，分別注射NFS1 siRNA+奧沙利鉑、control siRNA+奧沙利鉑、NFS1 siRNA+PBS、control siRNA+PBS）
給藥方式：瘤內(nèi)注射
給藥劑量：5nmol
給藥頻率：/
Fig2.注射NFS1 siRNA可增強(qiáng)奧沙利鉑體內(nèi)抗腫瘤作用
參考文獻(xiàn)：Lin J F, Hu P S, Wang Y Y, et al. Phosphorylated NFS1 weakens oxaliplatin-based chemosensitivity of colorectal cancer by preventing PANoptosis[J]. Signal transduction and targeted therapy, 2022, 7(1): 1-16.
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應(yīng)用案例3：
Journal of Hematology & Oncology（IF17.388）丨Circular RNA circHERC4 as a novel oncogenic driver to promote tumor metastasis via the miR-556-5p/CTBP2/E-cadherin axis in colorectal cancer
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研究模型：結(jié)直腸癌（選擇4周齡雌性BALB/c裸鼠，將1×107穩(wěn)定表達(dá)pLCDH-vector或pLCDH-circHERC4的SW480細(xì)胞通過(guò)上背注射或尾靜脈注射到裸鼠體內(nèi)，構(gòu)建皮下異種移植腫瘤模型和CRC轉(zhuǎn)移小鼠模型）
動(dòng)物模型：異種移植腫瘤模型和CRC轉(zhuǎn)移小鼠模型（分為4組，分別為circHERC4 OE + CTBP2 siRNA、circHERC4 OE + miR-556-5p mimic、對(duì)照組vector和circHERC4 OE）
給藥方式：瘤內(nèi)注射和尾靜脈注射
給藥劑量：1nmol和5nmol
給藥頻率：每周2次，注射60天后處死小鼠
Fig3. 注射CTBP2 siRNA或miR-556-5p mimic后可抑制circHERC4過(guò)表達(dá)導(dǎo)致的腫瘤生長(zhǎng)加速、以及肺和肝轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)的形成，阻礙circHERC4誘導(dǎo)的致癌作用
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參考文獻(xiàn)：He J, Chu Z, Lai W, et al. Circular RNA circHERC4 as a novel oncogenic driver to promote tumor metastasis via the miR-556-5p/CTBP2/E-cadherin axis in colorectal cancer[J]. Journal of hematology & oncology, 2021, 14(1): 1-20.
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應(yīng)用案例4：
Autophagy（16.016）丨m6A reader YTHDC1 modulates autophagy by targeting SQSTM1 in diabetic skin
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研究模型：糖尿病性皮膚（使用7-8周齡雄性2型糖尿病小鼠（BKD-Leprem2Cd479/Nju, db/db）和年齡匹配的野生型WT小鼠作為研究對(duì)象。在產(chǎn)生皮膚創(chuàng)面前2天（第-2天），使用6mm皮膚活檢打孔器在小鼠背部標(biāo)記一個(gè)圓圈。然后，WT-si-NC、WT-si-Ythdc1和WT-si-Sqstm1組在圓圈上皮內(nèi)注射相應(yīng)的siRNAs（si-NC、si-Ythdc1或si-Sqstm1）。2天后（第0天），用6mm皮膚活檢打孔器制作圓形全層皮膚創(chuàng)面，并從創(chuàng)面收獲皮膚組織。在創(chuàng)面建模后的第0、2、4和6天，WT-si-NC、WT-si-Ythdc1和WT-si-Sqstm1組皮內(nèi)注射相應(yīng)的siRNA（si-NC、si-Ythdc1或si- Sqstm1）于圓形創(chuàng)面邊緣）
動(dòng)物模型：糖尿病性皮膚創(chuàng)面愈合小鼠模型（分為3組，分別注射si-NC、si-Ythdc1或si- Sqstm1）
給藥方式：皮內(nèi)注射
給藥劑量：2.5 nmol
給藥頻率：分別在產(chǎn)生皮膚創(chuàng)面前2天、創(chuàng)面建模后第0、2、4和6天注射1次
Fig4. 注射si-Ythdc1或si-Sqstm1可導(dǎo)致小鼠皮膚中的創(chuàng)面愈合延遲（WT-si-NC: 78.822 ± 2.386%; WT-si-Ythdc1: 71.100 ± 1.888%; WT-si-Sqstm1: 70.176 ± 1.789%）
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參考文獻(xiàn)：Liang D, Lin W J, Ren M, et al. m6A reader YTHDC1 modulates autophagy by targeting SQSTM1 in diabetic skin[J]. Autophagy, 2021: 1-20.
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應(yīng)用案例5：
Cancer Research（IF12.701）丨Aberrant Nuclear Export of circNCOR1 Underlies SMAD7-Mediated Lymph Node Metastasis of Bladder Cancer
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研究模型：膀胱癌（將兩名膀胱癌患者的新鮮BCa樣本作為皮下腫瘤植入4周齡NSG小鼠體內(nèi)，即第一代F1；然后將F1小鼠的異種移植物切成小塊并移植到F2小鼠中；當(dāng)腫瘤達(dá)到1.5cm3時(shí)，將它們切除并分成等體積的塊并移植到F3小鼠中。當(dāng)PDX約為200mm3時(shí)，將F3小鼠隨機(jī)分組）
動(dòng)物模型：PDX小鼠模型（分為4組，分別注射Vector、體內(nèi)優(yōu)化的siSMAD7試劑、circNCOR1慢病毒、體內(nèi)優(yōu)化的siTGFBR1試劑）
給藥方式：瘤內(nèi)注射
給藥劑量：/
給藥頻率：每天注射一次，每5天停藥一次，給藥36天后處死小鼠
Fig5. 注射體內(nèi)優(yōu)化的siTGFBR1試劑顯著抑制了PDX模型腫瘤體積生長(zhǎng)，注射siSMAD7則得到相反的效果
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參考文獻(xiàn)：An M, Zheng H, Huang J, et al. Aberrant Nuclear Export of circNCOR1 Underlies SMAD7-Mediated Lymph Node Metastasis of Bladder Cancer[J]. Cancer Research, 2022.
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應(yīng)用案例6：
Cancer Research（IF12.701）丨N6-methyladenosine–Mediated Upregulation of WTAPP1 Promotes WTAP Translation and Wnt Signaling to Facilitate Pancreatic Cancer Progression
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研究模型：胰腺癌（將2×106 PDAC細(xì)胞通過(guò)皮下注射到5周齡雌性BALB/c裸鼠體內(nèi)，以構(gòu)建異種移植裸鼠模型；將三名患者的新鮮PDAC樣本作為皮下腫瘤植入4周齡NSG小鼠體內(nèi)，即第一代F1；然后將F1小鼠的異種移植物切成小塊并移植到F2小鼠中；當(dāng)腫瘤達(dá)到1.5cm3時(shí)，將它們切除并分成等體積的塊并移植到F3小鼠中，以構(gòu)建PDX小鼠模型）
動(dòng)物模型：胰腺癌異種移植裸鼠模型和PDX小鼠模型（分為2組，分別注射siControl、siWTAPP1）
給藥方式：靜脈注射
給藥劑量：75 mg/kg
給藥頻率：前3天每天進(jìn)行注射一次，之后3天注射一次，持續(xù)3周
Fig6. 異種移植裸鼠模型注射siWTAPP1顯著降低了腫瘤負(fù)荷并延長(zhǎng)了小鼠的存活時(shí)間；PDX模型給藥siWTAPP1顯著降低了PDX生長(zhǎng)率，且siWTAPP1試劑對(duì)小鼠無(wú)明顯毒性，因小鼠體重未顯著降低
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參考文獻(xiàn)：Deng J, Zhang J, Ye Y, et al. N6-methyladenosine–Mediated Upregulation of WTAPP1 Promotes WTAP Translation and Wnt Signaling to Facilitate Pancreatic Cancer Progression[J]. Cancer Research, 2021, 81(20): 5268-5283.
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應(yīng)用案例7：
Journal of Experimental & Clinical Cancer Research（IF11.161）丨circCUL2 induces an inflammatory CAF phenotype in pancreatic ductal adenocarcinoma via the activation of the MyD88-dependent NF-κB signaling pathway
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研究模型：胰腺導(dǎo)管腺癌（將3名患者的新鮮PDAC樣本皮下植入4周齡NSG小鼠體內(nèi)，即F1代；然后從F1小鼠中取出異種移植物，切成小塊并重新移植到其他小鼠F2。當(dāng)腫瘤達(dá)到約1500mm3時(shí)，將其切除并再次切成小塊，重新植入其他小鼠F3。7天后異種移植物達(dá)到約100mm3，將F3小鼠隨機(jī)分為3組）
動(dòng)物模型：胰腺導(dǎo)管腺癌PDX小鼠模型（分為3組，分別注射si-Control、si-circCUL2、針對(duì)IL6的中和抗體）
給藥方式：靜脈注射
給藥劑量：50mg/kg
給藥頻率：每3天一次，持續(xù)3周
Fig7. 注射si-circCUL2和anti-IL6抗體顯著減少了PDX生長(zhǎng)
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參考文獻(xiàn)：Zheng S, Hu C, Lin H, et al. circCUL2 induces an inflammatory CAF phenotype in pancreatic ductal adenocarcinoma via the activation of the MyD88-dependent NF-κB signaling pathway[J]. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research, 2022, 41(1): 1-23.
應(yīng)用案例8：
Journal of Allergy and Clinical Immunology（IF10.793）丨CircZNF652 promotes the goblet cell metaplasia by targeting the miR-452-5p/JAK2 signaling pathway in allergic airway epithelia
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研究模型：哮喘（使用8 周齡雌性BALB/c小鼠構(gòu)建卵清蛋白OVA誘導(dǎo)的哮喘小鼠模型。簡(jiǎn)言之，即第0天和第14天，在所有小鼠的腹股溝、背部、頸部和足墊通過(guò)皮下注射20μg/只乳化在2mg氫氧化鋁佐劑中的OVA以進(jìn)行致敏。從第22天到第28天，致敏小鼠用1% OVA或等體積的0.1 M PBS通過(guò)射流霧化器霧化30分鐘，每天一次，每次OVA霧化后2h，對(duì)小鼠進(jìn)行si-mmu-circZNF652處理）
動(dòng)物模型：過(guò)敏原誘導(dǎo)的變應(yīng)性氣道炎癥小鼠模型（分為3組，分別注射si-NC、1mg/ml siZNF652、3mg/ml siZNF652）
給藥方式：氣管給藥
給藥劑量：1mg/ml或3mg/ml（50ul/只）
給藥頻率：每天1次，共7天
Fig8. 灌注in vivo si-circZNF652-3減弱了過(guò)敏性氣道炎癥中的杯狀細(xì)胞化生
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參考文獻(xiàn)：Wang X, Xu C, Cai Y, et al. CircZNF652 promotes the goblet cell metaplasia by targeting the miR-452-5p/JAK2 signaling pathway in allergic airway epithelia[J]. Journal of Allergy and Clinical Immunology, 2022.
應(yīng)用案例9：
Oncogene（IF9.867）丨FGD3 binds with HSF4 to suppress p65 expression and inhibit pancreatic cancer progression
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研究模型：胰腺癌（使用LSL-KrasG12D/+; LSL-Trp53R172H/+; Pdx-1-Cre (KPC)轉(zhuǎn)基因小鼠作為動(dòng)物模型）
動(dòng)物模型：KPC轉(zhuǎn)基因小鼠模型（分為2組，分別注射siControl、siFGD3）
給藥方式：尾靜脈注射
給藥劑量：500 nmol/kg
給藥頻率：第48天開(kāi)始注射，每5天注射1次
Fig9. 注射siFGD3導(dǎo)致小鼠體內(nèi)腫瘤更大
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參考文獻(xiàn)：Guo F, Cheng X, Jing B, et al. FGD3 binds with HSF4 to suppress p65 expression and inhibit pancreatic cancer progression[J]. Oncogene, 2022: 1-14.
更多動(dòng)物用siRNA應(yīng)用案例持續(xù)更新中，敬請(qǐng)期待……
