PCR樣品準備須知
請根據樣品類型采用相應的操作：
一) 樣品處理
A. RNA樣品：取10μg總RNA，并提供RNA質量檢測圖。要求濃度在500ng/μl以上，體積在20μl以上，OD260/OD280的比值在1.8至2.0之間，電泳檢測28s的亮度約為18s的兩倍。-80℃貯存，干冰運輸。
B. 組織樣品：請將200mg以上的組織樣本，并用凍存管分裝為兩管，做好標記。-80℃或者液氮貯存，干冰運輸。
C. 血液樣品：請提供至少2mL血樣，并在2小時內處理完畢后加入Trizol，并做好標記。
1）全血：采集新鮮血液，建議QIAamp RNA Blood Mini Kit等全血樣品RNA提取試劑盒抽提RNA，或者新鮮血液分離白細胞；處理后的樣本放入干冰或者﹣80℃冰箱保存，干冰運輸。
2) 血漿：用EDTA等抗凝劑處理后的樣本，4℃?4000rpm離心5分鐘，上層為血漿樣本，按每200μl血漿樣本加入1ml Trizol的比率加入足量Trizol，渦旋搖勻，放入干冰或者-80℃冰箱保存，干冰運輸。
3) 血清：用非抗凝管收集血樣，靜置分離上層血清，按每200uL血清加入1ml Trizol的比率加入足量Trizol，渦旋搖勻，放入干冰或者-80℃冰箱保存，干冰運輸。
D. 細胞樣品：
a. 貼壁細胞
1) 貼壁細胞培養或處理結束后，去除培養液，預冷PBS清洗一次；
2) 按每10 cm2?培養面積加1 mL Trizol試劑的比例加入Trizol試劑搖勻，保證所有細胞接觸到Trizol而被充分消化；
3) 用1 ml槍頭反復吹打，并將Trizol細胞懸液轉移至RNAase-free 的EP管中，并做好標記；
4) 放入干冰或-80℃冰箱中保存，干冰運輸。
b. 懸浮細胞
1) 懸浮細胞培養或藥物處理結束后，離心去除培養液；
2) 所收集的細胞用預冷PBS 緩沖液快速清洗一次，離心除去PBS 緩沖液；
3) 按照每5×106?個細胞加1 mL Trizol的比例加入Trizol試劑，渦旋振蕩使細胞充分懸浮，并做好標記；
4) 放入干冰或-80℃冰箱中保存，干冰運輸。
注：提供B、C、D類樣品需支付￥60/樣品的前期處理費用。
二) 樣品信息卡
1) 請仔細填寫《PCR樣品信息卡》，提供樣品編號、數量、處理方式等信息。
2) 如果提供RNA，請同時提供RNA質量檢測相關數據和圖片，包括分光光度、電泳膠圖或Nanodrop儀器檢測數據。
注：樣品信息卡信息應與合同上標記信息相同，否則應該詳細列出一一對應表格。
三) 樣品包裝與標記
1) 建議使用1.5ml離心管包裝樣品，并且用封口膜密封。
2) 并在各樣品管上做好清晰的標識。
a.最好在管上和管蓋都用黑色Marker筆寫明樣品標識；
b.另在標簽紙上也寫上標識，貼在管壁；
注：管上的標識要與樣品信息卡上的標識完全相同。
四) 樣品運輸
1) RNA樣品，DNA樣品請用干冰運輸。
2) 細胞樣品，組織樣品，均用干冰運輸。
注：干冰運輸時間盡量不要超過72小時。
