（圖片來源于：Vickers and Crooke, 2015）
銳博生物采用國際一流的寡核苷酸合成和修飾技術，可針對lncRNA/circRNA/mRNA不同序列設計高特異性ASO序列，所合成的ASO序列是經過特殊化學修飾的單鏈RNA&DNA雜合體，極大地提高了其在細胞及動物體內的穩定性，可同時干擾胞質和核內的靶標RNA，亦可用于體內實驗。并且相對病毒載體，合成周期短，適于后續ASO核酸藥的研發。
動物用ASO體內給藥方法大致亦可分為系統給藥和局部給藥，系統給藥一般為5-20nmol，局部給藥為1-10nmol，也可根據實驗方案靈活設定給藥劑量和頻次，探索更佳的實驗條件。
本期文章小編給大家帶來了幾篇關于動物用ASO給藥方式的客戶應用案例，我們也將不定時地更新更多ASO在動物體內的應用策略，希望能夠對正在或即將要做動物實驗的各位小伙伴有一定的幫助！
應用案例1：
Molecular Cancer（IF15.302）丨LINC02273 drives breast cancer metastasis by epigenetically increasing AGR2 transcription
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研究模型：乳腺癌（將1×106?LM2細胞稀釋于50 μl無菌PBS中，并直接原位注射到NOD/SCID小鼠腹股溝乳腺脂肪墊中，每組n=8，以構建乳腺癌異種移植疾病模型）
動物模型：原位異種移植小鼠模型（將1×106?LM2細胞稀釋于100 μl無菌PBS中，并原位直接注入NOD/SCID小鼠乳腺脂肪墊中。注射2周后將小鼠隨機分成3組，每組n=8，然后分別注射ASO-1、ASO-2、ASO-NC）
給藥方式：尾靜脈注射
給藥劑量：10 nmol ASO（100μl，100mM ASO稀釋于PBS中）
給藥頻率：每周兩次，總共注射10次
Fig1. LINC02273對乳腺癌的潛在治療作用
參考文獻：Xiu B, Chi Y, Liu L, et al. LINC02273 drives breast cancer metastasis by epigenetically increasing AGR2 transcription[J].?Molecular cancer, 2019, 18(1): 1-20.
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應用案例2：
Nature Communications（IF12.121）丨Long noncoding RNA AGPG regulates PFKFB3-mediated tumor glycolytic reprogramming
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研究模型：食管鱗狀細胞癌（將來自患者的新鮮ESCC腫瘤樣品立即皮下接種到裸鼠兩側，構建PDX模型。當成功建立的PDXs（P1）達到?500 mm3時，將腫瘤移植到其他小鼠（P2）中。最終，將帶有P3移植物的荷瘤小鼠用于檢查AGPG抑制劑ASO的治療效果）
動物模型：患者來源的異種移植(PDX)模型（實驗組：注射AGPG抑制劑ASO；對照組：注射scrambled）
給藥方式：瘤內注射
給藥劑量：每次5nmol ASO
給藥頻率：每3天注射一次
Fig2. AGPG對體內腫瘤生長的影響
參考文獻：Liu J, Liu Z X, Wu Q N, et al. Long noncoding RNA AGPG regulates PFKFB3-mediated tumor glycolytic reprogramming[J].?Nature communications, 2020, 11(1): 1-16.
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應用案例3：
Molecular Cancer（IF15.302）丨CircLONP2 enhances colorectal carcinoma invasion and metastasis through modulating the maturation and exosomal dissemination of microRNA-17
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研究模型：結直腸癌（將未處理的CRC細胞系DLD-1細胞注射到裸鼠的尾側靜脈，以構建結直腸癌異種移植小鼠模型）
動物模型：結直腸癌異種移植小鼠模型（實驗組：注射ASO-circLONP2；對照組：注射ASO-NC）
給藥方式：尾靜脈注射
給藥劑量：/
給藥頻率：每3天注射一次，共4次
Fig3. 通過尾靜脈注射ASO-circLONP2可以顯著減弱CRC細胞向肺的轉移
參考文獻：Han K, Wang F W, Cao C H, et al. CircLONP2 enhances colorectal carcinoma invasion and metastasis through modulating the maturation and exosomal dissemination of microRNA-17[J].?Molecular cancer, 2020, 19(1): 1-18.
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應用案例4：
Nature Communications（IF12.121）丨LncRNA DILA1 inhibits Cyclin D1 degradation and contributes to tamoxifen resistance in breast cancer
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研究模型：乳腺癌（將1×107個MCF7-Re細胞懸浮于0.1 ml無菌PBS中，直接原位注射到NOD/SCID小鼠乳腺脂肪墊中，以構建乳腺癌異種移植小鼠模型）
動物模型：乳腺癌異種移植小鼠模型（將MCF7-Re異種移植小鼠隨機分為6組：(1)陰性對照組，(2)ASO-1組，(3)ASO-2組，(4)他莫昔芬組，(5)他莫昔芬+ASO-1組，(6)他莫昔芬+ASO-2組）
給藥方式：瘤內注射
給藥劑量：5nmol
給藥頻率：每2天注射一次
Fig4. 將DILA1-ASOs注射到小鼠體內可抑制腫瘤生長，恢復對他莫昔芬耐藥腫瘤的敏感性
參考文獻：Shi Q, Li Y, Li S, et al. LncRNA DILA1 inhibits Cyclin D1 degradation and contributes to tamoxifen resistance in breast cancer[J].?Nature communications, 2020, 11(1): 1-15.
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應用案例5：
Nature Metabolism丨The long noncoding RNA lnc-ob1 facilitates bone formation by upregulating Osterix in osteoblasts
研究模型：骨形成（將成骨細胞特異性Sp7-cre小鼠與cre依賴性lnc-ob1 KI小鼠交配，以產生成骨細胞特異性lnc-ob1 KI小鼠，見下圖a）
動物模型：lnc-ob1 KI小鼠模型（分為2組：KI+control ASO組、KI+lnc-ob1 ASO組）
給藥方式：靜脈注射
給藥劑量：10mg/kg
給藥頻率：每周注射一次，持續四周
Fig5. 注射lnc-ob1 ASO抑制了lnc-ob1 KI小鼠的骨形成率
參考文獻：Sun Y, Cai M, Zhong J, et al. The long noncoding RNA lnc-ob1 facilitates bone formation by upregulating Osterix in osteoblasts[J].?Nature Metabolism, 2019, 1(4): 485-496.
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應用案例6：
Stem Cells（IF6.021）丨Mesenchymal stem cells alleviate AQP-4-dependent glymphatic dysfunction and improve brain distribution of antisense oligonucleotides in BACHD mice
研究模型：亨廷頓氏舞蹈?。˙ACHD小鼠購自Jackson Laboratories，并維持在同類系FVB/N背景下。根據臨床前ASO研究，使用10至12周齡的雌性FBV/N野生型(WT)或BACHD小鼠進行進一步實驗）
動物模型：BACHD小鼠模型
給藥方式：腦池內注射
給藥劑量：700ug/10ul
給藥頻率：注射速率為2?μL/minute
Fig6. 腦池內注射ASO后通過類淋巴系統以AQP-4依賴性方式分布在腦組織中
參考文獻：Wu T, Su F, Feng Y, et al. Mesenchymal stem cells alleviate AQP‐4‐dependent glymphatic dysfunction and improve brain distribution of antisense oligonucleotides in BACHD mice[J].?STEM CELLS, 2020, 38(2): 218-230.
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應用案例7：
Cell Death & Disease（IF6.304）丨circ5615 functions as a ceRNA to promote colorectal cancer progression by upregulating TNKS
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研究模型：結直腸癌（將5×106個SW480細胞皮下注射到小鼠的單側腹中，以構建異種移植結直腸癌腫瘤模型）
動物模型：裸鼠異種移植瘤模型（分為兩組：ASO-circ5615組和ASO-NC組）
給藥方式：瘤內注射
給藥劑量：30nmol
給藥頻率：每周2次，共3周
Fig7. 瘤內注射circ5615 ASO可抑制腫瘤生長
參考文獻：Ma Z, Han C, Xia W, et al. circ5615 functions as a ceRNA to promote colorectal cancer progression by upregulating TNKS[J].?Cell death & disease, 2020, 11(5): 1-14.
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更多動物用ASO應用案例持續更新中，敬請期待……
