重磅丨銳博生物lncRNA FISH Probe/siRNA全面助力腫瘤轉移最新研究成果
食管癌（EC）是世界上發病率最高的癌癥類型之一。食管鱗狀細胞癌（ESCC）是食管癌的主要亞型。由于局部侵襲和遠處轉移的結合，使得食管癌患者的總體生存率只保持在15-25％。并且許多食管癌患者在診斷時已經表現出轉移。許多研究表明基因表達、細胞因子分泌、上皮-間質轉化（EMT）和腫瘤微環境的改變與轉移有關。因此，了解腫瘤轉移的分子機制將為腫瘤治療提供新的機遇。長非編碼RNAs（lncRNAs）在癌癥發展中起著關鍵的作用。研究表明，lncRNAs可能作為轉移監測的生物標志物，并可作為抑制轉移的治療靶點。下面小編通過解析一篇發表在Cell Death & Differentiation上的文章《LncRNA CASC9 promotes esophageal squamous cell carcinoma metastasis through upregulating LAMC2 expression by interacting with the CREB-binding protein》，帶大家一起看看lncRNA促進腫瘤轉移的研究套路。
1）??LncRNA CASC9的篩選
在之前的研究中，研究人員對ESCC及鄰近正常組織進行lncRNA microarray（fig1A），發現CASC9在ESCC組織中過表達，敲降CASC9可抑制細胞生長，Edu檢測發現CASC9的敲降顯著細胞增殖。為了探討CASC9與ESCC轉移的關系，研究人員擴大群體樣本并使用RT-qPCR發現CASC9在ESCC組織中顯著上調（fig1B），進一步分析顯示CASC9的表達升高與ESCC預后及轉移相關（fig1CD）。
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2）??LncRNA CASC9體內外功能研究
隨后，在體外使用siRNA敲降CASC9，發現ESCC的遷移和侵襲被完全抑制（fig2ABD），CASC9過表達則得到相反的結果。體內裸鼠實驗也證實了敲降CASC9可顯著減少ESCC的轉移。表明CASC9在ESCC中的促轉移作用。
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3）??LncRNA CASC9調控功能分析
接著，為了全面了解CASC9功能的分子機制，研究人員進行Microarray分析與機制實驗發現CASC9優先影響與ECM-整合素相互作用相關的基因表達（fig3f），其中包括整合素通路上游誘導物LAMC2。并且證明了LAMC2在ESCC組織中也上調，可促進ESCC轉移（fig3CE），LAMC2過表達可增強細胞的遷移和侵襲（fig4B），表明LAMC2在協調ESCC轉移過程中起到與CASC9相似的作用。挽救實驗顯示LAMC2過表達部分損害了CASC9敲降導致的細胞遷移和侵襲能力的下降（fig4C）。表明LAMC2是CASC9誘導的轉移活性的主要下游介質。
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此外，研究人員發現CASC9和LAMC2的缺失減少了整合素通路下游效應物FAK、PI3K和Akt的磷酸化作用。并且LAMC2過表達可挽救CASC9缺失引起的磷酸化水平的減少（fig5AB），證實了CASC9通過LAMC2激活FAK-PI3K/Akt信號通路從而發揮ESCC促轉移作用。
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4）??LncRNA CASC9作用機制研究
最后，研究人員確定了CASC9調控LAMC2的機制。首先RNA FISH實驗確定了CASC9分布于細胞質和細胞核中（fig6A）。生物信息分析發現LAMC2啟動子區域中有豐富的H3K27ac富集，提示LAMC2可能受染色質乙酰化調控，而CREB結合蛋白（CBP）是修飾染色質乙酰化最重要的酶之一，那么CBP是否參與LAMC2的調控呢？研究人員使用siRNA敲降CBP可顯著減少LAMC2的mRNA和蛋白水平（fig6BC）。此外，RNA pull-down和RIP實驗表明CASC9可以與細胞核中的轉錄輔激活因子CREB結合蛋白（CBP）結合（fig6EF）。另外，ChIP實驗也說明CASC9增加LAMC2啟動子中CBP和H3K27乙酰化的富集，從而上調LAMC2的表達（fig6G）。表明CASC9通過與CBP結合并修飾組蛋白乙酰化來上調LAMC2的表達。
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本研究使用到的RiboTM lncRNA FISH Probe/siRNA由銳博生物提供。
