一擊必中！試試這個RNA結合蛋白研究新策略
RNA結合蛋白（RNA binding protein，RBP）是細胞中一類重要的蛋白質，RBP通過識別特殊的RNA結合域與RNA互作，廣泛參與到RNA的剪切、轉運、序列編輯、胞內定位及翻譯控制等多個轉錄后調控過程中。
許多研究發現，一些RBP的功能異常會導致包括前列腺癌、胃癌及其他癌癥的發生和轉移、中風后神經發生和功能恢復、肌萎縮側索硬化（ALS）等多種疾病和進展，RBP也是目前研究人員尋找預防與治療諸多絕癥的備受期待的潛在靶點區域，最近再次受到科學家們的極大關注。
RBP種類繁多，但目前僅對部分RBP的功能較為清晰，如AGO、HuR、AUF1、TTP、CUGBP2等，其中很多是與ncRNA互作，RBP控制非編碼RNA胞內定位、甲基化修飾、miRNA沉默復合體形成、可變剪切等生物學過程。在非編碼RNA的研究中，RBP的功能顯得極其重要，對于RBP潛在功能篩選，具有重要生物學研究和臨床意義。
今天，小編給大家介紹一種快速簡單的RBP研究方法
請看新策略和傳統方法的比較
下面為大家解讀一下該新策略吧！
1）?如何快速進行RBP功能篩選？
常見的RBP功能篩選研究方法是先通過高通量測序、進行多次基于數據庫生物信息學分析逐步篩選目的基因，或基因文獻挖掘來尋找已知的RBP編碼基因，然后再借助各種繁瑣的細胞學實驗來研究RBP的功能。這看起來沒啥毛病，但過程卻是極其煎熬的，有木有？如果有一種更高效快捷且精準的方法，您想不想知道呢~~~
RBP siRNA文庫+高內涵分析與篩選一步輕松搞定RBP功能篩選
近年來，基因文庫越來越多地應用于高通量篩選目的基因功能或尋找全新的作用靶點，因為這種方法極其快速高效，可以一網打盡所有感興趣的靶標或序列，不僅數倍縮短實驗周期，單位篩選成本比合成單個或幾個基因更低，還可以讓科學家騰出大把時間進行后續實驗，比如RBP與RNA相互作用調控機制研究，或者其作用域/結合位點的研究等。
銳博生物憑借多年RNAi文庫經驗，自主研發了人類RBP siRNA文庫，結合亞洲領先的IN Cell激光共聚焦高內涵分析與篩選平臺，只需簡單地將RBP siRNA文庫序列轉染進細胞，隨后通過高內涵平臺進行高通量RBP功能篩選，從而全面鑒定出與某個生物學過程或通路有關的候選RBP，從而指導下游RBP與RNA相互作用的研究，由于高內涵文庫篩選出的基因功能都更為確定，大大減輕了后續的功能驗證實驗，讓科學家對蛋白質與lncRNA及其他相關RNA分子的研究進程大大加快。
銳博生物高內涵成像與分析篩選實驗一般流程
對于還不熟悉基因文庫的您，我們再進一步介紹一下RBP文庫。
genOFF??RBP siRNA Premix Library
1、RBP文庫涵蓋1199個重要RBP基因，靶向不同轉錄本，覆蓋面更廣
2、采用優化的siCatch?siRNA設計方法，沉默效率更高，脫靶更低
3、采用96孔板封裝，每孔對應一個基因，可做50次篩選（工作濃度50nM）
4、一次實驗即可分析大批量基因，實現大規模高通量的功能篩選
RBP文庫的提供形式：96孔板，每孔可做50次篩選
優化設計，沉默效率更高
激光共聚焦高內涵分析與篩選
銳博生物重磅推出的激光共聚焦高內涵分析與篩選服務(HCA&HCS)，利用優秀的成像技術及強大的圖像處理技術，從細胞或細胞群體中提取信號數據，進行包含細胞及亞細胞形態結構信息等的多參數量化分析，結合高速成像甚至自動化的成像檢測，建立標準化的分析流程分析參數，可實現快速高通量篩選的工作。基于高內涵篩選本身的特性，幾乎所有基于熒光成像檢測和分析的技術都可直接在高內涵平臺上獲得更有價值的發現，IN Cell激光共聚焦高內涵平臺可提供完美細胞影像與精準定量信息，誕生更高價值的數據影像結果。
相比傳統的生物學功能與機制研究手段，HCA&HCS在發現新的靶點、功能及機制方面能夠：
1、更深入理解復雜的細胞學機理和相互作用
2、非破壞性活細胞功能的多標記/多靶點/多參數分析與篩選
3、高通量快速大規模細胞學分析，從單個細胞至細胞群組
4、實驗時間從幾天縮短至幾個小時或幾分鐘
5、提出更多細胞學問題，產生更多原創新研究成果
當然，如果您的樣本量比較大或不考慮細胞成像的質量，還可以選擇銳博生物的Acumen eX3平臺進行基因功能篩選。如果您第一步就采用高內涵文庫篩選策略，文章的檔次水平相比傳統研究策略已是大幅度提高了！因為基于細胞表型的功能篩選大數據結果往往更佳的可靠性和說服力！
通過RBP siRNA文庫+高內涵分析與篩選方法確定目標RBP的細胞表型及基因功能后，RBP是如何發揮作用的呢？與其直接結合的關鍵RNA靶標有哪些？為了解決上述問題，銳博生物還可提供RIP-Seq/CLIP-Seq 測序服務用于識別RBP靶標及RBP與RNA相互作用機制的研究。
2）??RBP結合RNA靶標的鑒定
RNA免疫共沉淀測序（RIP-Seq）
1、全轉錄組覆蓋：可在全轉錄組范圍對蛋白結合位點進行篩選與鑒定
2、高靈敏度：每個樣本可獲得數百萬條的序列標簽，檢測轉錄組上稀有的蛋白結合位點
3、高精確率：可獲得高水平的信噪比數據，準確區分真實事件與噪音
4、紫外交聯免疫沉淀結合測序（CLIP-Seq）
5、準確性高：從活細胞交聯開始，真實反映體內環境下的分子間相互作用
6、特異性強：紫外輻射不會造成蛋白和蛋白之間的交聯，特異性鑒定蛋白和RNA之間的相互作用
7、應用廣泛：特別適用于剪接因子RNA結合圖譜、miRNA作用靶點等研究
3）??RNA分子功能研究
通過RIP-Seq/CLIP-Seq和生物信息分析確定RBP結合的RNA靶標后，RNA分子功能研究也是需要進一步解決的科學問題，從而進一步提高文章的檔次水平。銳博生物提供各類RNA分子體外/體內的功能研究解決方案，從細胞實驗到動物實驗，涵蓋領先的miRNA、lncRNA和circRNA的設計合成產品，受到廣大研究人員的高度認可。
所以，RBP研究不用那么復雜，只需一步，就能輕松搞定RBP功能篩選；只需三步，就能完成一篇RBP研究高質量文章啦！
